馬波沙星在多殺性巴氏桿菌感染小鼠體內(nèi)的藥動-藥效學(xué)同步模型研究.pdf

1、通過建立多殺性巴氏桿菌感染的小鼠肺炎感染模型，比較馬波沙星在感染小鼠體內(nèi)的血漿、肺組織、上皮細(xì)胞襯液中（epithelial lining fluid，ELF）的藥動學(xué)特點，探究馬波沙星在肺部的滲透能力；采用不同的單藥劑量給藥方案治療肺部感染的小鼠，測定體內(nèi)馬波沙星的抗菌效應(yīng)。結(jié)合馬波沙星在多殺性巴氏桿菌感染的小鼠血漿藥動學(xué)和藥效學(xué)研究，建立馬波沙星對多殺性巴氏桿菌的體內(nèi)藥動學(xué)/藥效學(xué)（PK/PD）模型，并監(jiān)測給藥治療后感染部位耐藥細(xì)菌

2、選擇性富集，以期為獸醫(yī)臨床馬波沙星治療動物呼吸道疾病提供基礎(chǔ)實驗數(shù)據(jù)。本研究的主要內(nèi)容及結(jié)果如下：
　　采用微量肉湯稀釋法，參考CLSI相關(guān)資料，測定馬波沙星對三株多殺性巴氏桿菌的最小抑菌濃度（MIC），結(jié)果表明馬波沙星對CVCC434、CVCC411、CVCC1669的MIC分別為0.125、0.03125、0.0625μg/mL；采用瓊脂平板法測定馬波沙星對三株多殺性巴氏桿菌的防突變濃度(MPC)，結(jié)果表明，馬波沙星對多殺性巴

3、氏桿菌CVCC434、CVCC411、CVCC1669的MPC分別為0.5、0.2、0.3μg/mL。
　　采用氣管插管法分別對中性粒細(xì)胞減少和免疫正常的小鼠進(jìn)行肺部感染，接菌量為5×108CFU/mL(50μL)，小鼠于感染后12、24 h分別處死，立即無菌操作取出肺部，勻漿后菌落計數(shù)。結(jié)果表明：免疫正常小鼠感染多殺性巴氏桿菌后，細(xì)菌在小鼠肺部細(xì)菌生長情況差異大，且有明顯的自身清除現(xiàn)象，無法建立穩(wěn)定的肺炎模型。中性粒細(xì)胞減少的小

4、鼠感染12 h，肺部菌量達(dá)到~5×107 CFU，小鼠出現(xiàn)嗜睡，呼吸急促等癥狀，以此作為馬波沙星給藥治療的時間點，感染24 h后，所有小鼠接近死亡，肺部菌量高達(dá)109 CFU。故本研究采用中性粒細(xì)胞減少的小鼠建立小鼠肺炎感染模型。
　　小鼠感染多殺性巴氏桿菌12 h后，皮下注射不同劑量（2.5、5、10、20 mg/kg）的馬波沙星后，在給藥后0.083，0.25，0.5，1，2，4，6，8，12，24 h獲得血漿、支氣肺泡管灌洗

5、液和取肺組織樣品。建立馬波沙星在三種生物樣品中的提取方法，采用高效液相色譜法（HPLC）檢測小鼠血漿、肺組織、支氣管灌洗液中的馬波沙星濃度，用脲酶試劑盒測定血漿和支氣管灌洗液中的尿素氮的比值，通過公式上皮細(xì)胞襯液（ELF）的藥物濃度=支氣管肺泡灌洗液(bronchialveolarlavage，BAL)藥物濃度×血漿尿素氮/支氣管肺泡灌洗液尿素氮的比值，來計算上皮細(xì)胞襯液的馬波沙星濃度。應(yīng)用WinNonlin5.2.1藥動學(xué)軟件提供的非

6、房室模型對藥物濃度-時間數(shù)據(jù)進(jìn)行處理。結(jié)果表明：馬波沙星在感染小鼠肺組織的藥物濃度是血漿藥物濃度的2~3倍，上皮細(xì)胞襯液的藥物濃度稍高于血漿藥物濃度，上皮細(xì)胞襯液中藥物AUC與血漿游離藥物AUC的比值約為2；馬波沙星在感染小鼠體內(nèi)的藥動學(xué)過程呈線性。
　　建立3株多殺性巴氏桿菌感染小鼠肺炎模型，采用8種不同的給藥劑量對感染小鼠進(jìn)行治療，考察馬波沙星對多殺性巴氏桿菌的體內(nèi)抗菌效應(yīng)。結(jié)合血漿藥動學(xué)參數(shù)和體外MIC值，采用Sigmoid