鴨源多殺性巴氏桿菌分離鑒定及感染雛鴨動態(tài)病理學(xué)觀察.pdf

1、多殺性巴氏桿菌（Pasteurella multocida,P.m）是一種危害畜禽養(yǎng)殖業(yè)的常見菌，禽類中鴨對其最為敏感。本研究通過對臨床分離到的一株多殺性巴氏桿菌的鑒定及藥敏試驗，了解其耐藥情況；通過動物回歸試驗測定其毒力及不同接菌方式對其毒力的影響，并探討了 TNF-α和 IL-1β在致炎中的作用，以期對該病病理損傷機制的深入研究提供基礎(chǔ)資料，同時為該病臨床診斷和防控提供理論依據(jù)。主要工作：
　　1從湖北省武漢市周邊地區(qū)某鴨廠臨

2、床病例中分離到一株細(xì)菌，進(jìn)行生化鑒定，培養(yǎng)特征鑒定，16S rDNA鑒定，藥敏試驗和動物回歸試驗。結(jié)果顯示該菌屬于Fo型多殺性巴氏桿菌（命名為PM株）。該分離株對磺胺類，大環(huán)內(nèi)酯類等多種抗生素敏感；16S rDNA部分序列與Genbank公布的牛源、羊源、豬源和雞源多殺性巴氏桿菌16S rDNA序列同源性均在99％，與溶血性巴氏桿菌同源性在93%以下。提示不同物種來源多殺性巴氏桿菌的16S rDNA序列較為保守，但仍存在個別位點突變現(xiàn)象

3、。
　　2比較了灌胃、皮下接菌、支氣管接菌和腳蹼接菌對雛鴨毒力的影響。皮下和支氣管接菌均對雛鴨表現(xiàn)出高毒力，腳蹼接菌毒力稍弱，但采用高劑量0.5mL（2×105CFU/mL）進(jìn)行灌胃未見雛鴨發(fā)病。結(jié)果表明多殺性巴氏桿菌不通過消化道途徑感染雛鴨。
　　3復(fù)制雛鴨感染多殺性巴氏桿菌動物模型。用0.5mL（約4×102CFU/mL）菌液經(jīng)腳蹼感染18日齡櫻桃谷鴨，能引起雛鴨產(chǎn)生以急性出血性敗血癥為主的典型禽霍亂癥狀。發(fā)病雛鴨臨床特

4、征以食欲廢絕，飲欲升高，畏寒，無法直立行走，口鼻流涎為主。病程持續(xù)1~3d。臨床癥狀明顯期為接菌后第10h；第24h開始零星死亡，至48h達(dá)到高峰；48h后發(fā)病率降低，72h后癥狀緩解，采食飲水逐漸恢復(fù)。結(jié)果說明多殺性巴氏桿菌強毒株感染雛鴨后病程呈“一過性”經(jīng)過，臨床表現(xiàn)主要以呼吸道損傷為主。
　　4分別在感染后第4h、10h、24h、40h、49h、7d進(jìn)行剖殺，進(jìn)行動態(tài)組織病理學(xué)觀察。結(jié)果顯示肝臟在感染后4h出現(xiàn)水泡變性，24

5、h出現(xiàn)凝固性壞死灶；肺臟在10h出現(xiàn)明顯淤血和出血及異嗜性粒細(xì)胞浸潤，40h出現(xiàn)壞死灶；胸腺在4h出現(xiàn)“星空狀”淋巴細(xì)胞缺失；脾臟在24h呈空泡狀并伴有大量異嗜性粒細(xì)胞浸潤；法氏囊在40h淋巴濾泡內(nèi)淋巴細(xì)胞壞死。結(jié)果表明P.m可以導(dǎo)致多個器官產(chǎn)生炎癥，早期損傷器官為肝臟、肺臟、大腦和胸腺；P.m可以對免疫器官造成嚴(yán)重?fù)p傷，且最先激活機體細(xì)胞免疫。
　　5白細(xì)胞計數(shù)顯示在8h、10h、17h和24h接菌組異嗜性粒細(xì)胞/淋巴細(xì)胞比值高

6、于空白組，40h后無明顯差異；ELISA法測試血清中 TNF-α含量，結(jié)果顯示2h、4h、6h、10h、11h、17h、24h、40h、48h接菌組和空白組血清TNF-α含量均差異不顯著（P>0.05）；利用 SABC免疫組化法對接菌組脾臟、肺臟和法氏囊進(jìn)行IL-1β染色，結(jié)果顯示法氏囊和肺臟中IL-1β陽性信號IOD值均極顯著高于空白組（P<0.01），脾臟 IOD值則顯著高于空白組（P<0.05）。結(jié)果顯示IL-1β參與致炎，但未觀