鴨源多殺性巴氏桿菌的分離鑒定及其CRISPR位點(diǎn)的分布和結(jié)構(gòu)特征.pdf

1、多殺性巴氏桿菌（Pasteurella multocida,PM）是一種引起畜禽發(fā)生出血性敗血癥或傳染性肺炎的病原菌，可在多種健康動(dòng)物的口腔、咽部黏膜中存活。該菌廣泛分布于世界各地，對(duì)養(yǎng)鴨業(yè)造成重大經(jīng)濟(jì)影響。由于抗生素濫用，使該菌耐藥情況愈來愈嚴(yán)重。耐藥基因的水平轉(zhuǎn)移是多殺性巴氏桿菌獲得耐藥性的主要方式之一，而原核細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)的CRISPR-Cas系統(tǒng)，能有效阻止基因水平轉(zhuǎn)移。為今后深入探究多殺性巴氏桿菌中CRISPR-Cas系統(tǒng)與其耐藥

2、性之間的關(guān)系，本課題首次對(duì)多殺性巴氏桿菌中CRISPR序列結(jié)構(gòu)進(jìn)行解析，并初步探討了CRISPR位點(diǎn)與多殺性巴氏桿菌耐藥情況之間的關(guān)系。
　　本研究首先對(duì)來自4個(gè)不同規(guī)?；唸?chǎng)的疑似禽霍亂病料剖檢，病鴨呈全身出血性敗血癥，心外膜、心冠脂肪大面積出血，全身黏膜、漿膜點(diǎn)狀出血，肝臟有針尖狀白色壞死灶等典型癥狀。經(jīng)麥康凱培養(yǎng)基篩選、革蘭染色、PCR、Biolog全自動(dòng)微生物鑒定系統(tǒng)，獲得4株臨床分離株均為多殺性巴氏桿菌，經(jīng)K-B紙片藥敏

3、實(shí)驗(yàn)均表現(xiàn)為多重耐藥。
　　為進(jìn)一步分析多殺性巴氏桿菌中CRISPR-Cas系統(tǒng)序列結(jié)構(gòu)，先后提取4株臨床分離株及7株實(shí)驗(yàn)室保存的多殺性巴氏桿菌全基因組，進(jìn)行高通量測(cè)序，同時(shí)從NCBI下載11株多殺性巴氏桿菌全基因組序列，對(duì)總共22株多殺性巴氏桿菌基因組上的CRISPR-Cas系統(tǒng)進(jìn)行比對(duì)。通過CRISPR-Cas系統(tǒng)分布情況，以及對(duì)先導(dǎo)序列、重復(fù)序列、間隔序列的分析，結(jié)果表明，在22株多殺性巴氏桿菌基因組上存在三種類型的CRIS

4、PR-Cas系統(tǒng):Ⅰ-F型、Ⅱ-C型和Ⅲ-U型，且存在以下特征:1、每種CRISPR-Cas系統(tǒng)中，先導(dǎo)序列、重復(fù)序列及Cas蛋白三者之間相互影響;2、Ⅰ-F型系統(tǒng)中，重復(fù)序列第4位堿基突變對(duì)二級(jí)結(jié)構(gòu)影響最大，Ⅲ-U型系統(tǒng)中，重復(fù)序列第9位堿基突變對(duì)二級(jí)結(jié)構(gòu)影響最大;3、在三種系統(tǒng)中，共1314個(gè)間隔序列，但僅一例多殺性巴氏桿菌噬菌體F108與間隔序列匹配;4、不同地理位置分離的菌株，所包含的間隔序列數(shù)量存在差異。同時(shí)，為了解目前生產(chǎn)中