HPV16E6-E7對人角質(zhì)形成細胞的生物學(xué)特性及其生長調(diào)控因子的影響.pdf

1、第四軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文HPV16E6/E7對人角質(zhì)形成細胞的生物學(xué)特性及其生長調(diào)控因子的影響姓名：馬翠玲申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：皮膚病與性病學(xué)指導(dǎo)教師：劉玉峰2000.5.1第四軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文H P V l 6 E 6 ／E 7 基因?qū)θ私琴|(zhì)形成細胞的生物學(xué)特性及其生長調(diào)控因子的影響摘 要隊乳頭瘤病毒( H P V ) 是小D N A 病毒，主要感染人的上皮細胞，可誘導(dǎo)皮膚粘膜的多種增生性損傷，目前至少鑒定出有7 0 種以上H

2、P V 亞型，特定的H P V 亞型易感染特定的解剖部位。約有3 5型H P V 與生殖道感染有關(guān)且可通過性傳播。多數(shù)H P V 感染的結(jié)果是慢性的良性增生，少數(shù)類型與生殖器惡性腫瘤有關(guān)，其中H P V l 6 型是與宮頸上皮內(nèi)腫瘤及鱗狀細胞癌相關(guān)的最常見類型。H P V l 6 在體外可以引起小鼠成纖維細胞系的惡性轉(zhuǎn)化及人角質(zhì)形成細胞的永生化，但永生化細胞并無裸鼠致瘤性。H P V E 6 ／E 7 基因在病毒轉(zhuǎn)化過程中起重要作用，E

3、 6 、E 7 可能通過分別與p 5 3 和p R b結(jié)合，改變其腫瘤抑制作用誘導(dǎo)細胞永生化，但是其它一些主要的細胞生長調(diào)節(jié)基因也是E 6 、E 7 作用的目標，H P V E 6 ／E 7 引起細胞永生化的機理仍然不清楚。有報道永生化細胞的細胞周期蛋白表達異常，但是正常細胞向永生化或惡性轉(zhuǎn)化過程中，尤其是病毒感染早期細胞生長調(diào)節(jié)改變的研究較少。H P V 體外轉(zhuǎn)染細胞為研究病毒和細胞基因之間的相互作用機理以及細胞的生長調(diào)節(jié)異常與癌變的

4、關(guān)系方面提供了一個理想模型。／為了探討H P V l 6 E 6 ／E 7基因?qū)θ私琴|(zhì)形成細胞生長及其調(diào)控因子的影響，我們從“H P V l 6 E 6 ／E 7 轉(zhuǎn)染人角質(zhì)形成細胞”、“轉(zhuǎn)染細胞的生物學(xué)特征觀察”和“H P V l 6 E 6 ／E 7 對人角質(zhì)形成細胞生長及其調(diào)控因子的影響”等方面進行了實驗研究。倍果顯示：、 1 ．人角質(zhì)形成細胞感染表達H P V l 6 E 6 ／E 7 重組逆轉(zhuǎn)錄病毒后，形成G 4 1 8 抗性

5、克隆，通過傳代培養(yǎng)獲得多個能長期培養(yǎng)的角質(zhì)形成細胞，其中來自三個轉(zhuǎn)化克隆的細胞體外培養(yǎng)2 0 代以上；2 ．H P v l 6 E 6 ／E 7 轉(zhuǎn)染的人角質(zhì)形成細胞表達角蛋白、細胞間形成橋粒結(jié)構(gòu)，證實其來源于表皮角質(zhì)形成細胞。經(jīng)細胞基因組S o u t h e r n 印跡分析證實E 6 ／E 7 基因已整合至轉(zhuǎn)化的人角質(zhì)形成細胞中， 核酸原位雜交、W e s t e r n 印跡實驗和H P V l 6 E 6 ／E 7 抗原間．2