神經(jīng)元凋亡時(shí)GSK-3介導(dǎo)Bim線粒體轉(zhuǎn)位的研究.pdf

1、中山大學(xué)碩士學(xué)位論文神經(jīng)元凋亡時(shí)GSK-3介導(dǎo)Bim線粒體轉(zhuǎn)位的研究姓名：閔志群申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：藥理學(xué)指導(dǎo)教師：黎明濤20090520l l I 山人學(xué)碩士學(xué)位論文 神經(jīng)元凋亡時(shí)G S K ．3 介導(dǎo)B i m 線粒體轉(zhuǎn)位的研究為明確小腦顆粒神經(jīng)元凋亡時(shí)B i m 細(xì)胞內(nèi)呈現(xiàn)局部聚集現(xiàn)象足否是因?yàn)榘l(fā)生線粒體轉(zhuǎn)位而引起，我們采用特異的線粒體熒光染料M i t 0 1 ' r a c k e r 及B i m 抗體分別標(biāo)記線

2、粒體及B i m ，分析兩者的共定位系數(shù)。結(jié)果表明：凋亡時(shí)，B i m 與線粒體的共定位系數(shù)增加，說明在撤鉀誘導(dǎo)的C G N 凋亡模型中B i m 發(fā)生了線粒體轉(zhuǎn)位。進(jìn)一步，我們尋找凋亡時(shí)介導(dǎo)B i m 線粒體轉(zhuǎn)位的上游信號(hào)。B i m 在生理狀態(tài)下主要與動(dòng)力蛋白結(jié)合而不能定位于線粒體。采用生物信息學(xué)方法對(duì)B i m 的氨基酸序列進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)在與動(dòng)力蛋白輕鏈D L C l 結(jié)合的關(guān)鍵區(qū)域中，有一段序列符合G S K ．3底物模序，且該

3、序列在不同種屬間相對(duì)保守。提示B i m 的線粒體轉(zhuǎn)位可能是由G S K ．3介導(dǎo)的。G S K - 3 ( g l y c o g e ns y n t h a s ek i n a s e ．3 ) 是一個(gè)多功能的絲氨酸／蘇氨酸激酶，包含兩個(gè)亞型：G S K 3 aa n dG S K 3 D 。G S K 3 僅的第2 l 位絲氨酸和G S K 3 D 的第9 位絲氨酸被上游的激酶磷酸化后，G S K ．3 的活性降低。在撤鉀誘導(dǎo)

4、小腦顆粒神經(jīng)元凋亡時(shí)，此位點(diǎn)的磷酸化水平降低，G S K ．3 活性增強(qiáng)。通過G S K ．3 抑制劑抑制G S K ．3 的激酶活性，可以有效地保護(hù)神經(jīng)元，但神經(jīng)元凋亡時(shí)G S K ．3 的底物尚不明確，各種證據(jù)表明是通過破壞線粒體引起的凋亡，這也為G S K ．3 介導(dǎo)B i m 線粒體轉(zhuǎn)位提供了一定的理論基礎(chǔ)。為了說明G S K ．3 與B i m 線粒體轉(zhuǎn)位的關(guān)系，我們?cè)诔封浱幚頃r(shí)加入G S K ．3 的抑制劑，再分析B i m

5、 和線粒體的共定位系數(shù)。結(jié)果顯示：G S K ．3 的抑制劑C T 9 9 0 2 l 和S B 4 1 5 2 8 6 抑制了B i m 的線粒體轉(zhuǎn)位。進(jìn)一步為了排除G S K ．3 抑制劑的非特異作用，我們?cè)O(shè)計(jì)了G S K ．3 的小分子干擾片段。與對(duì)照片段相比，G S K ．3 的小分子干擾片段有效的抑制了凋亡時(shí)B i m 的線粒體轉(zhuǎn)位。以上結(jié)果初步表明，B i m 的線粒體轉(zhuǎn)位可能是由G S K ．3 介導(dǎo)的。綜上所述，本課題首