Notch信號相關(guān)基因在多藥耐藥人紅白血病細胞K562-A02與親本細胞K562間差異表達的研究.pdf

1、目的：多藥耐藥是目前白血病治療的主要障礙,Notch信號通路在細胞增殖、分化、凋亡中發(fā)揮重要作用,推測其可能參與白血病多藥耐藥性的形成。本研究旨在檢測多藥耐藥人紅白血病細胞K562/A02與其親本細胞K562間Notch信號相關(guān)基因的差異表達,探討Notch信號相關(guān)基因在急性髓系白血病耐藥機制中的作用,為急性髓系白血病的靶向治療提供實驗室基礎(chǔ)。
　　 方法：利用MTT法檢測阿霉素對多藥耐藥人紅白血病細胞K562/A02及其親本細

2、胞K562的細胞殺傷作用,計算其半數(shù)抑制濃度(IC50)；利用激光共聚焦顯微鏡檢測兩種細胞內(nèi)的阿霉素的相對濃度；提取細胞總RNA,采用cDNA微點陣技術(shù),檢測兩種細胞間113個Notch信號相關(guān)基因差異表達；應(yīng)用實時定量逆轉(zhuǎn)錄PCR和Western印跡驗證cDNA微點陣技術(shù)檢測結(jié)果。
　　 結(jié)果：
　　 1.MTT法顯示多藥耐藥人紅白血病細胞K562/A02的IC50是其親本細胞K562的65倍(4.57±0.38vs0

3、.07±0.01μg/ml,P<0.05),從而驗證了K562/A02細胞的耐藥性。
　　 2.激光共聚焦顯微鏡檢測顯示多藥耐藥人紅白血病細胞K562/A02細胞內(nèi)平均熒光密度比親本細胞K562低,其細胞內(nèi)阿霉素累積少,進一步說明K562/A02細胞的耐藥性。
　　 3.cDNA微點陣技術(shù)顯示,與親本細胞K562相比,在113個Notch信號相關(guān)基因中,多藥耐藥人紅白血病細胞K562/A02有52個基因表達上調(diào),其中上調(diào)

4、兩倍以上的有5個(CD44、DLL3、IL17B、NUMB、NUMBL),主要為膠原基因和增殖相關(guān)基因；61個基因表達下調(diào),其中下調(diào)兩倍以上的有8個(FZD9、GBP2、GLI1、GLI2、IFNG、KRT5、Notch2、Notch3),主要為信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄因子相關(guān)基因。
　　 4.實時定量逆轉(zhuǎn)錄PCR檢測了Notch信號相關(guān)基因Notch1和Hes1在K562/A02細胞與K562細胞間的表達,其結(jié)果與Notch信號通路基因