Notch信號(hào)相關(guān)基因在多藥耐藥人紅白血病細(xì)胞K562-A02與親本細(xì)胞K562間差異表達(dá)的研究.pdf

1、目的：多藥耐藥是目前白血病治療的主要障礙,Notch信號(hào)通路在細(xì)胞增殖、分化、凋亡中發(fā)揮重要作用,推測(cè)其可能參與白血病多藥耐藥性的形成。本研究旨在檢測(cè)多藥耐藥人紅白血病細(xì)胞K562/A02與其親本細(xì)胞K562間Notch信號(hào)相關(guān)基因的差異表達(dá),探討Notch信號(hào)相關(guān)基因在急性髓系白血病耐藥機(jī)制中的作用,為急性髓系白血病的靶向治療提供實(shí)驗(yàn)室基礎(chǔ)。
　　 方法：利用MTT法檢測(cè)阿霉素對(duì)多藥耐藥人紅白血病細(xì)胞K562/A02及其親本細(xì)

2、胞K562的細(xì)胞殺傷作用,計(jì)算其半數(shù)抑制濃度(IC50)；利用激光共聚焦顯微鏡檢測(cè)兩種細(xì)胞內(nèi)的阿霉素的相對(duì)濃度；提取細(xì)胞總RNA,采用cDNA微點(diǎn)陣技術(shù),檢測(cè)兩種細(xì)胞間113個(gè)Notch信號(hào)相關(guān)基因差異表達(dá)；應(yīng)用實(shí)時(shí)定量逆轉(zhuǎn)錄PCR和Western印跡驗(yàn)證cDNA微點(diǎn)陣技術(shù)檢測(cè)結(jié)果。
　　 結(jié)果：
　　 1.MTT法顯示多藥耐藥人紅白血病細(xì)胞K562/A02的IC50是其親本細(xì)胞K562的65倍(4.57±0.38vs0

3、.07±0.01μg/ml,P<0.05),從而驗(yàn)證了K562/A02細(xì)胞的耐藥性。
　　 2.激光共聚焦顯微鏡檢測(cè)顯示多藥耐藥人紅白血病細(xì)胞K562/A02細(xì)胞內(nèi)平均熒光密度比親本細(xì)胞K562低,其細(xì)胞內(nèi)阿霉素累積少,進(jìn)一步說(shuō)明K562/A02細(xì)胞的耐藥性。
　　 3.cDNA微點(diǎn)陣技術(shù)顯示,與親本細(xì)胞K562相比,在113個(gè)Notch信號(hào)相關(guān)基因中,多藥耐藥人紅白血病細(xì)胞K562/A02有52個(gè)基因表達(dá)上調(diào),其中上調(diào)

4、兩倍以上的有5個(gè)(CD44、DLL3、IL17B、NUMB、NUMBL),主要為膠原基因和增殖相關(guān)基因；61個(gè)基因表達(dá)下調(diào),其中下調(diào)兩倍以上的有8個(gè)(FZD9、GBP2、GLI1、GLI2、IFNG、KRT5、Notch2、Notch3),主要為信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄因子相關(guān)基因。
　　 4.實(shí)時(shí)定量逆轉(zhuǎn)錄PCR檢測(cè)了Notch信號(hào)相關(guān)基因Notch1和Hes1在K562/A02細(xì)胞與K562細(xì)胞間的表達(dá),其結(jié)果與Notch信號(hào)通路基因