靶向納米脂質(zhì)微泡超聲造影劑制備及其體外尋靶能力實驗研究.pdf

1、實驗研究 目的：制備一種新型納米級脂質(zhì)微泡超聲造影劑，并通過動物實驗評價其顯影效果。 方法：將一定比例的二棕櫚酰磷脂酰膽堿（DPPC）、二苯基磷酰基疊氮化物（DPPA）、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺（DSPE）及甘油、甘露醇等混合均勻后，采用機(jī)械振蕩法，制備一種新型納米級脂質(zhì)氟碳微泡聲學(xué)造影劑；通過光學(xué)顯微鏡及電子顯微鏡觀察測定微泡的形態(tài)、分散度、均一性及濃度，利用Malvern激光粒徑檢測儀及表面電位檢測儀分別檢測微泡粒徑大小

2、與分布、表面電位等物理特性；經(jīng)兔耳緣靜脈分別先后團(tuán)注相同劑量（3.0×109/ml，0.25 ml/kg）的自制納米脂質(zhì)微泡造影劑和普通脂質(zhì)微泡造影劑，動態(tài)觀察兔肝臟實質(zhì)回聲增強(qiáng)情況，應(yīng)用DFY型超聲圖像分析診斷儀對兔肝臟實質(zhì)回聲時間-強(qiáng)度曲線進(jìn)行定量分析，評價其顯影效果。 結(jié)果：自制納米脂質(zhì)微泡造影劑大小均勻，平均粒徑為（415.4±51.8）nm、平均表面電位為-（13.7±1.6）mV；經(jīng)靜脈注射后，該納米微泡造影劑能明顯

3、增強(qiáng)兔肝臟的二維灰階顯像，與普通脂質(zhì)微泡造影劑比較，其峰值強(qiáng)度略低、達(dá)峰時間較晚，但增強(qiáng)持續(xù)時間較普通脂質(zhì)微泡造影劑長（P均<0.05）。 結(jié)論：自制納米微泡造影劑形態(tài)好，粒徑均一，具有良好的顯影增強(qiáng)效果。因其粒徑小，可穿過腫瘤新生毛細(xì)血管內(nèi)皮間隙，為實現(xiàn)腫瘤血管外靶向顯影與治療研究提供了一個前期基礎(chǔ)。 目的：制備一種靶向乳腺癌的納米脂質(zhì)微泡超聲造影劑，并觀察其體外尋靶能力。 方法：制備生物素化抗人乳腺癌細(xì)胞單克

4、隆抗體Neu（F-11），利用紫外分光光度法和細(xì)胞ELISA法分別檢測抗體的生物素化程度和抗體生物素化后的活性；采用機(jī)械振蕩法制備生物化納米脂質(zhì)微泡，通過生物素-親和素系統(tǒng)，將生物素化納米脂質(zhì)微泡與生物素化抗體連接，制備靶向納米脂質(zhì)微泡超聲造影劑，Malvern激光粒徑檢測儀及表面電位檢測儀分別檢測微泡粒徑大小與分布、表面電位等物理特性，免疫熒光染色實驗定性檢測造影劑與抗體的連接情況，細(xì)胞結(jié)合實驗檢測其體外尋靶能力。 結(jié)果：每分

5、子抗體可結(jié)合的生物素分子數(shù)目平均為7個，生物素化抗體的活性與游離單抗相比未見明顯降低（p<0.05）；靶向納米脂質(zhì)微泡平均粒徑為（573.4±65.8）nm、平均表面電位為-（31.7±1.6）mV，免疫熒光染色實驗顯示靶向納米脂質(zhì)微泡超聲造影劑表面可見明亮的紅色環(huán)狀熒光，細(xì)胞結(jié)合實驗顯示其可與乳腺癌細(xì)胞特異性牢固結(jié)合。 結(jié)論：生物素.親和素系統(tǒng)可使造影劑與抗體牢固結(jié)合，所制備的靶向納米脂質(zhì)微泡超聲造影劑在體外具有較強(qiáng)的尋靶能力