靶向VEGFR2光聲-超聲雙模態(tài)造影劑的制備及體外實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、第一部分靶向VEGFR2光聲/超聲雙模態(tài)造影劑的制備及其特性研究
　　目的：制備一種靶向血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體2（VEGFR2）的光聲/超聲雙模態(tài)高分子造影劑，檢測(cè)其一般物理性質(zhì)，體外光致相變效果及相變過程中光聲信號(hào)的變化情況。
　　方法：采用多步乳化法制備載有印度墨水和液態(tài)氟碳（PFH）的高分子造影劑；通過碳二亞胺法將抗VEGFR2單克隆抗體與高分子造影劑表面活化的羧基（-COOH）相偶聯(lián)，制備出靶向VEGFR2高分子造影劑

2、（Vi-PFH-PLGA）。檢測(cè)其結(jié)構(gòu)，粒徑，吸收光譜等一般物理性質(zhì)，并通過間接免疫熒光法及流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)抗體與造影劑的連接情況。考察Vi-PFH-PLGA的體外光致相變情況，近紅外光輻照，光學(xué)顯微鏡下觀察Vi-PFH-PLGA相變效果，光聲成像儀采集其相變過程中光聲信號(hào)變化情況。
　　結(jié)果：所制備的靶向高分子造影劑形態(tài)規(guī)則，呈球形，平均粒徑為(565.5±15.6) nm,平均電位為(-15.8±3.21)，紫外分光光度計(jì)測(cè)得V

3、i-PFH-PLGA在400~900nm處均具有較好的光吸收能力，間接免疫熒光法觀察到抗體成功的連接到造影劑表面，且流式細(xì)胞儀測(cè)得抗體微球連接率為99.72％。Vi-PFH-PLGA溶液經(jīng)近紅外光輻照后，光學(xué)顯微鏡下觀察到較多的Vi-PFH-PLGA發(fā)生液氣相轉(zhuǎn)變產(chǎn)生微泡，光聲成像儀檢測(cè)到其相變過程中可產(chǎn)生較強(qiáng)的光聲信號(hào)，且信號(hào)強(qiáng)度隨著時(shí)間的變化呈迅速升高后逐漸降低至穩(wěn)定的趨勢(shì)。
　　結(jié)論：成功制備出靶向VEGFR2光聲/超聲雙模

4、態(tài)造影劑，其形態(tài)規(guī)則，分布均勻，抗體連接率高，具備較好的光聲學(xué)特性和光致相變能力，為后續(xù)的體外尋靶及雙模態(tài)顯像實(shí)驗(yàn)打下了良好的基礎(chǔ)。
　　第二部分靶向VEGFR2光聲/超聲雙模態(tài)造影劑的體外尋靶及顯影研究
　　目的：觀察所制備的靶向VEGFR2光聲/超聲雙模態(tài)造影劑的體外尋靶能力及光聲/超聲顯影效果。
　　方法：制備出DiI標(biāo)記的靶向VEGFR2光聲/超聲雙模態(tài)造影劑(Vi-PFH-PLGA)，激光共聚焦顯微鏡下觀察V

5、i-PFH-PLGA與體外培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)的結(jié)合情況，并設(shè)置非靶向組及游離抗體封閉組進(jìn)行對(duì)照，評(píng)價(jià)其體外尋靶能力。采用近紅外光輻照靶向造影劑2min后,光聲成像儀下采集Vi-PFH-PLGA經(jīng)近紅外光輻照前后的光聲、超聲及造影模式圖，并設(shè)置單純的印度墨水(ink組)和單純的液態(tài)氟碳納米粒（PFH-PLGA組）進(jìn)行對(duì)照，評(píng)價(jià)其體外雙模態(tài)顯影效果。
　　結(jié)果：體外尋靶能力實(shí)驗(yàn)顯示，激光共聚焦顯微鏡下可見較多的Vi-

6、PFH-PLGA呈花環(huán)狀牢固的聚集在人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞HUVEC表面，而非靶向組和抗體干預(yù)組未見造影劑與HUVEC的特異性結(jié)合。體外光聲/超聲顯影實(shí)驗(yàn)顯示，Vi-PFH-PLGA可檢測(cè)到明顯的光聲信號(hào),經(jīng)近紅外光輻照后其超聲信號(hào)較輻照之前明顯增高(P<0.05)，且信號(hào)強(qiáng)度明顯高于ink組和PFH-PLGA組(P<0.05)。
　　結(jié)論：靶向VEGFR2光聲/超聲雙模態(tài)造影劑與HUVEC細(xì)胞具有較強(qiáng)的靶向結(jié)合能力并具備較好的光聲/超