靶向載金納米棒高分子液態(tài)氟碳雙模態(tài)造影劑制備及體外尋靶與顯影實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、第一部分VCAM-1靶向光聲/超聲雙模態(tài)納米級(jí)分子探針的制備及其體外尋靶實(shí)驗(yàn)
　　目的：制備一種炎癥靶向光聲/超聲雙模態(tài)的納米級(jí)分子探針，檢測(cè)該分子探針一般物理特性，并對(duì)其進(jìn)行體外尋靶能力研究。
　　方法：采用雙乳化法分別制備包裹金納米棒（Gold nanorods）與液態(tài)氟碳（全氟己烷，PFH）的高分子聚合物（羧基端乳酸-羥基乙酸共聚物，PLGA）納米粒(GNPs)、單純包裹PFH的納米粒（NPs）和單純包裹金納米棒的納米

2、粒（Au-NPs）；采用碳二亞胺法制備與血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附因子（VCAM-1）單抗相連的靶向納米粒（VCAM-1-GNPs）；光鏡、電鏡分別觀察檢測(cè)各三種納米粒的形態(tài)、粒徑和電位；采用流式細(xì)胞儀觀察 GNPs與 VCAM-1單抗連接情況；用激光輻照儀對(duì)VCAM-1-GNPs、NPs及Au-NPs進(jìn)行輻照，并觀察三種納米粒的光致相變情況；用不同濃度腫瘤壞死因子（TNF-α）作用于人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVECs）后，采用蛋白質(zhì)印跡法(West

3、ern Blot)測(cè)量 HUVECs膜上VCAM-1的表達(dá)情況；選擇VCAM-1最佳表達(dá)量的TNF-α濃度作用于人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞是為靶向組，未做任何處理作為非靶向組，分別觀察靶向組和非靶向兩組細(xì)胞分別與VCAM-1-GNPs的結(jié)合情況。
　　結(jié)果：VCAM-1-GNPs平均粒徑和電位分別為615.86±8.6nm，-17.90±3.04mV，各納米粒形態(tài)大小無差異；流式細(xì)胞儀檢測(cè) GNPs和 VCAM-1單抗的連接率為99.87％

4、；近紅外激光輻照后VCAM-1-GNPs發(fā)生相變，而NPs與Au-NPs未見相變；TNF-α各濃度組作用于細(xì)胞后表面均可見VCAM-1表達(dá)，其中10 ng/ml組與低濃度組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＜0.05），與100 ng/ml組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＞0.05）；光鏡下靶向組VCAM-1-GNPs與HUVECs特異性結(jié)合，非靶向組則未見結(jié)合。
　　結(jié)論：成功制備 VCAM-1靶向載金納米棒高分子液態(tài)氟碳光聲/超聲雙模態(tài)靶向納

5、米級(jí)分子探針，大小一致，形態(tài)規(guī)則。VCAM-1-GNPs光致相變效果明顯，具有良好的靶向能力，為下一步體內(nèi)外光聲/超聲雙模態(tài)顯像打下了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　第二部分靶向載金納米棒高分子液態(tài)氟碳光聲/超聲雙模態(tài)造影劑體外顯影實(shí)驗(yàn)研究
　　目的：觀察VCAM-1-GNPs體外雙模態(tài)（光聲/超聲）顯影效果。
　　方法三種納米粒（VCA-1-MGNPs、NPs、Au-NPs）的制備方法同前；觀察VCAM-1-GNPs不同濃度體外光聲

6、/超聲雙模態(tài)顯影效果；觀察GNPs、Au-NPs、NPs在激光輻照前后二維超聲和光聲顯像。
　　結(jié)果：VCAM-1-GNPs隨著載金納米棒高分子液態(tài)氟碳雙模態(tài)納米級(jí)造影劑濃度的增加，光聲信號(hào)也隨之增強(qiáng)；近紅外激光輻照前，VCAM-1-GNPs、Au-NPs、NPs二維超聲均為低回聲；輻照后，VCAM-1-GNPs超聲和光聲增強(qiáng)顯影，Au-NPs光聲增強(qiáng)顯影，超聲未見增強(qiáng)顯影未見變化，NPs二維超聲及光聲均未見增強(qiáng)顯影。