RGD靶向MRI-熒光雙模態(tài)分子探針的構(gòu)建及體外實驗研究.pdf

1、目的：①本研究嘗試構(gòu)建一種新型靶向腫瘤新生血管的 MRI/熒光雙模態(tài)分子探針—cRGDfK-lipo(QDs)-SPIO，并表征其理化性質(zhì)；②通過體外細(xì)胞學(xué)實驗，研究其體外細(xì)胞毒性，并探討探針的體外腫瘤靶向性和雙模態(tài)成像性能。
　　方法：采用薄膜分散法合成核心親水層包載超順磁性氧化鐵、疏水脂質(zhì)雙分子層包載油溶性量子點的雙模態(tài)脂質(zhì)納米粒，然后采用后插入法連接靶向配體RGD，制備靶向性雙模態(tài)分子探針。測定脂質(zhì)體對SPIO、QDs的包封

2、率、脂質(zhì)體的磷脂含量，采用1H-NMR、FT-IR對接枝共聚物進行表征。檢測其磁豫率、外觀形態(tài)、粒徑分布、Zeta電位。
　　體外細(xì)胞毒性情況分析采用MTS檢測。人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVEC）培養(yǎng)及傳代，并將細(xì)胞分為三組：靶向?qū)嶒灲M：加入靶向MRI/熒光雙模態(tài)分子探針；非靶向?qū)嶒灲M：加入非靶向性MRI/熒光雙模態(tài)分子探針；對照組：加入未經(jīng)包裹修飾的SPIO顆粒。根據(jù)各孔的吸光度值計算細(xì)胞存活率。
　　體外靶向性研究采用普魯士

3、藍染色和細(xì)胞熒光成像觀察。人卵巢癌細(xì)胞（SKOV3）培養(yǎng)及傳代，制備細(xì)胞懸液準(zhǔn)備。普魯士藍染色實驗中，將細(xì)胞分為兩組：靶向?qū)嶒灲M：加入靶向MRI/熒光雙模態(tài)分子探針；非靶向?qū)嶒灲M：加入非靶向性MRI/熒光雙模態(tài)分子探針。經(jīng)過普魯士藍染色封片，于倒置顯微鏡下觀察。細(xì)胞熒光顯微鏡觀察中，將細(xì)胞同樣分成靶向?qū)嶒灲M和非靶向?qū)嶒灲M。兩組經(jīng)過DAPI染色標(biāo)記細(xì)胞核，于熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞熒光情況。
　　結(jié)果：制備的RGD靶向性MRI/熒光雙模

4、態(tài)分子探針平均粒徑為（160.5±3.1）nm，Zeta電位為（-36.86±1.78）mV，帶負(fù)電荷。cRGDfK-lipo(QDs)-SPIO的SPIO、QDs包封率均在80％以上。通過1H-NMR和FT-IR結(jié)果證實RGD靶向接枝物合成成功。磁共振T2弛豫率為0.6368×106 mM-1s-1。透射電鏡示該分子探針呈球形或類球形，并證實鐵顆粒被包封在脂質(zhì)體內(nèi)，透視電鏡及能譜分析證實量子點顆粒包封于脂質(zhì)體雙分子膜內(nèi)。探針半年內(nèi)溶液

5、較穩(wěn)定、未出現(xiàn)分層、沉淀、渾濁，且熒光性能亦較穩(wěn)定。
　　RGD靶向MRI/熒光雙模態(tài)分子探針、無靶向 MRI/熒光雙模態(tài)分子探針、SPIO顆粒與人臍靜脈細(xì)胞HUVEC共同孵育24h后，MTS檢測結(jié)果示SPIO顆粒組細(xì)胞活性受到抑制，而濃度100μg/ml范圍內(nèi)的靶向及無靶向雙模態(tài)分子探針對細(xì)胞活性基本無抑制。
　　RGD靶向MRI/熒光雙模態(tài)分子探針與人卵巢癌細(xì)胞SKOV3共孵育12h后，普魯士藍染色細(xì)胞內(nèi)可見大量藍染鐵顆

6、粒；而非靶向分子探針、SPIO顆粒與SKOV3細(xì)胞共同孵育12h后，普魯士藍染色細(xì)胞內(nèi)藍染鐵顆粒含量極低或沒有發(fā)現(xiàn)。該分子探針與SKOV3細(xì)胞共孵育12h后，細(xì)胞熒光顯微鏡觀察示靶向性分子探針組細(xì)胞內(nèi)在350~400nm激發(fā)波段可見紅色熒光顆粒，而非靶向組細(xì)胞內(nèi)未見紅色熒光顆粒。
　　結(jié)論：①RGD修飾的MRI/熒光雙模態(tài)分子探針具有良好的理化性質(zhì)，制備方法簡單，實驗操作可控性好，性質(zhì)較穩(wěn)定，具有較高的 T2弛豫作用及穩(wěn)定的紅外熒