超聲聯(lián)合微泡造影劑介導基因轉染的體內外實驗研究.pdf

1、第一部分
　　 目的：探討不同超聲輻照時間和微泡劑量與基因轉染效率之間的關系，初步摸索適宜轉染的參數(shù)條件。
　　 方法：報告基因用增強型綠色熒光蛋白質粒（pEGFP），以人肝癌細胞（HepG2）為研究對象。超聲頻率1MHz，聲強0.5W/cm2，對加入pEGFP和不同劑量微泡造影劑（MB）的HepG2細胞輻照不同時間。24h后用熒光顯微鏡觀察綠色熒光蛋白表達情況，流式細胞儀檢測基因轉染效率，臺盼蘭染色檢測細胞存活率。

2、r>　　 結果：各試驗組均可見不同程度熒光蛋白表達，輻照時間為20s和微泡劑量為60μl時可達到較理想的轉染效率。
　　 結論：在超聲頻率和聲強一定條件下，不同超聲輻照時間和微泡造影劑劑量有不同的基因轉染效率,20s、60μl是一個較理想的參數(shù)，為基因治療進一步研究提供了參考。
　　 第二部分
　　 目的：初步探討靜脈注射共聚物Pluronic P85和黏附質粒的微泡造影劑（MB），同時經體表給予一定強度的超聲

3、輻照，能否增強輻照部位局部組織的基因轉染與表達。
　　 方法：質粒DNA用綠色熒光蛋白質粒（pEGFP）。建立裸鼠肝癌皮下移植瘤模型。含有pEGFP轉染液經尾靜脈注入。實驗分為3組，第一組：pEGFP +超聲輻照（US）；第二組：pEGFP+MB+超聲輻照（US）；第三組：pEGFP+MB+P85+超聲輻照（US）。脈沖多普勒超聲輻照(1MHz，0.5W/cm2)瘤組織，持續(xù)時間2min,7d后用活體熒光成像分析系統(tǒng)分析，然后取

4、腫瘤組織快速冰凍切片，熒光顯微鏡計數(shù)EGFP陽性的細胞，HE染色評價其組織損傷情況。
　　 結果：第二組和第三組有較多的綠色熒光蛋白的表達，第一組綠色熒光蛋白表達較少，第三組表達量高于第一、二組，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05），第二組表達量高于第一組，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。HE染色腫瘤組織無壞死灶出現(xiàn)。
　　 結論：初步得知共聚物Pluronic P85可增強超聲輻照微泡造影劑介導基因轉染與表達，可能具