蕓芥（Eruca Sativa Mill）發(fā)狀根的誘導(dǎo)、超低溫保存及次生代謝物的分析.pdf

1、本文通過實驗建立了發(fā)根農(nóng)桿菌R1000介導(dǎo)的蕓芥的高效遺傳轉(zhuǎn)化體系，為通過發(fā)狀根的大規(guī)模培養(yǎng)進(jìn)而生產(chǎn)其次生代謝物而奠定了基礎(chǔ)，主要研究結(jié)果如下： 1).在所使用的Ri000、A4和LBA9402三種發(fā)根農(nóng)桿菌中，Ri000對蕓芥的轉(zhuǎn)化頻率最高，A4和LBA9402次之，且在三種不同的外植體(子葉、胚狀體、下胚軸)中，子葉的轉(zhuǎn)化率最高(28.9％)；若把外植體在沒有激素的MS培養(yǎng)基上進(jìn)行預(yù)培養(yǎng)有利于轉(zhuǎn)化，其中預(yù)培養(yǎng)2天誘導(dǎo)率最高，

2、可達(dá)29.5％，且將外植體在農(nóng)桿菌懸浮液中侵染20min效果較好，可得到較高的轉(zhuǎn)化頻率； 2).對誘導(dǎo)出的發(fā)狀根進(jìn)行了PCR檢測，擴(kuò)增結(jié)果表明，發(fā)根農(nóng)桿菌Ri質(zhì)粒的rolB基因序列已經(jīng)整合到蕓芥發(fā)狀根基因組中； 3).用發(fā)狀根誘導(dǎo)出了愈傷組織并再生成植株，其中最佳的誘導(dǎo)和分化培養(yǎng)基激素組合分另0為MS+NAA(2.0mg/l)+BA(0.1mg/1)和MS+BA(1.5mg/l)+IAA(0.5mg/l)； 4)

3、.發(fā)狀根大量擴(kuò)繁的最佳條件為：在3L的三角瓶中裝入1/2MS液體培養(yǎng)基兒，于室溫條件下，110r/min的搖床上，震蕩懸浮培養(yǎng)； 5).可溶性全蛋白的SDS-PAGE表明，與普通根相比，在發(fā)狀根的可溶性蛋白中有一條明顯的差異條帶出現(xiàn)； 6).氯化鈀法測得蕓芥發(fā)狀根中硫苷含量僅為普通根的62.5％，而高效液相色譜顯示蕓芥發(fā)狀根中存在著4種硫苷； 7).用包埋玻璃化法成功對蕓芥發(fā)狀根種質(zhì)進(jìn)行了超低溫冷凍保存，成活率高