抗腫瘤新藥S14161及其衍生化合物BENC-511抗前列腺癌的藥理作用研究.pdf

1、目的：PI3K/Akt信號通路是前列腺癌的一個重要治療靶標,而S14161是本課題組前期篩選出的一個PI3K抑制劑,對惡性血液病等多種腫瘤細胞具有較強的凋亡誘導(dǎo)作用。為了進一步提高其抗腫瘤活性,我們對其進行了結(jié)構(gòu)優(yōu)化,得到一系列衍生物,其中BENC-511具有更強的抑制PI3K的活性。本課題中我們將比較S14161和BENC-511這兩種化合物對雄激素非依賴型前列腺癌細胞株(PC3和DU145)的抑制作用及機制,并在裸鼠移植瘤模型中分析

2、兩種化合物的藥效,從而為研發(fā)抗前列腺癌的新藥提供一定的參考。
　　方法：
　　1.觀察S14161和BENC-511處理前列腺癌細胞(PC3和DU145)后細胞形態(tài)的變化,MTT法檢測兩種化合物對細胞增殖的抑制作用;
　　2.流式細胞技術(shù)檢測兩種化合物對細胞凋亡率的影響,并通過蛋白免疫印跡法檢測凋亡相關(guān)蛋白表達水平的變化;
　　3.蛋白免疫印跡法檢測兩種化合物對PI3K/Akt/mTOR信號通路相關(guān)蛋白的表達及磷

3、酸化的影響;
　　4.建立 NOD/SCID裸鼠的皮下接種前列腺癌的移植瘤模型,在體內(nèi)水平分析兩種化合物對前列腺癌的抑制作用;
　　5.用轉(zhuǎn)染技術(shù)使PTEN缺失的PC3細胞表達PTEN蛋白,檢測PC3對化合物敏感程度的變化。
　　結(jié)果：
　　1.S14161和BENC-511均能抑制多種實體瘤細胞株的存活,MTT實驗表明兩種化合物均能抑制前列腺癌細胞PC3和DU145的增殖,該抑制作用呈濃度的依賴性,但是PC3對

4、BENC-511更為敏感;
　　2.S14161與BENC-511均能顯著誘導(dǎo)前列腺癌細胞的凋亡,而BENC-511誘導(dǎo)凋亡的能力明顯強于S14161;此外,PC3細胞株對這兩種化合物的敏感程度顯著高于DU145細胞株;這兩種化合物均能誘導(dǎo)凋亡標志蛋白PARP和Caspase-3的激活,并呈現(xiàn)劑量依賴性關(guān)系;
　　3.S14161能在PC3細胞株中顯著抑制PI3K信號通路的活化及信號傳導(dǎo),但是對DU145細胞株的抑制作用則不

5、明顯;而BENC-511不但能對PC3細胞株(PTEN缺失型)的PI3K通路產(chǎn)生更強的抑制作用,也能對DU145細胞株產(chǎn)生一定的抑制作用;
　　4.S14161和BENC-511均能在抑制裸鼠體內(nèi)PC3及DU145的移植瘤生長,但是BENC-511對腫瘤的抑制作用要強于S14161;此外,這兩種化合物均能抑制腫瘤組織中的Akt的磷酸化,并能促進PARP的剪切激活;
　　5.PC3是PTEN缺失型前列腺癌細胞,在PC3細胞中重

6、新表達PTEN蛋白后,化合物誘導(dǎo)PARP的剪切程度下降,PC3對化合物BENC-511的敏感性下降。
　　結(jié)論：S1416和BENC-511能顯著誘導(dǎo)前列腺癌細胞株P(guān)C3和DU145的凋亡,抑制PI3K/Akt通路的激活及信號傳導(dǎo),并且BENC-511的作用強于其母體化合物S14161;PC3和DU145對這兩種化合物的敏感性存在一定差異,原因可能是PC3是PTEN缺失型的細胞株,它的PI3K/Akt通路異?；罨?更易被此通路的藥