大鼠雙下肢伸直襁褓體位下的髖關節(jié)脫位病理演變的組織學觀察.pdf

1、發(fā)育性髖關節(jié)發(fā)育不良（DDH）是指因某種因素導致患兒出生時或者在發(fā)育過程中髖臼陡淺甚至股骨頭脫出髖臼之外的病理現(xiàn)象，描述嬰兒及兒童先天性或發(fā)育性髖關節(jié)解剖結構異常的統(tǒng)稱。DDH包括髖關節(jié)不穩(wěn)定、半脫位、脫位和髖臼發(fā)育不良。DDH的病因及發(fā)病機制至今不明，除先天因素外，生后體位因素，肌力失衡、關節(jié)囊松弛等起重要作用。
　　目的：本實驗擬通過人為改變出生后體位即雙下肢伸直襁褓體位來研究該體位下髖臼關節(jié)軟骨的病理組織學演變。髖臼軟骨復合

2、體在發(fā)育過程中鈣鹽沉積骨化從而形成骨性髖臼，所以在此過程中，髖臼軟骨復合體的形態(tài)及發(fā)育改變直接影響髖臼的最終形態(tài)。髖臼軟骨復合體的正常生長發(fā)育通過軟骨細胞不斷增殖和凋亡的結果，應用免疫組化方法研究雙下肢伸直襁褓體位下新生幼鼠髖臼軟骨形態(tài)及細胞的成熟、增殖和凋亡情況，以研究髖臼發(fā)育不良與髖臼軟骨復合體的細胞成熟、增殖及凋亡表達情況之間的關系。
　　方法：制作大鼠下肢伸直襁褓體位及研究該體位下大鼠髖臼的病理組織學演變
　　1.下

3、肢伸直襁褓體位大鼠模型制作。
　　1.1 Wistar新生幼鼠6窩（每窩12只，雌雄各半）
　　1.2試劑：Brdu原液，Abcam公司提供。
　　1.3模型制作：剛出生即新生幼鼠1號窩隨機取3只雌鼠、3只雄鼠進行編號，抽取的鼠雙腿、雙髖關節(jié)處醫(yī)用膠帶纏繞固定，呈髖關節(jié)內(nèi)收伸直、雙下肢并攏位，并固定尾部活動，膝關節(jié)可活動，其余幼鼠做對照，不作處理。每日下午松解固定膠帶一次，松解半小時后重新固定。所有幼鼠均由母鼠母乳同時

4、喂養(yǎng)，籠內(nèi)自由活動。1號窩分別于3，6，9天后處死所有實驗組與對照組幼鼠，進行取材，制作石蠟標本。處死前2小時，行腹腔內(nèi)注射Brdu原液，濃度10mg/ml。
　　1.42號窩新生幼鼠同法處理，處死前2小時，腹腔內(nèi)注射 Brdu原液，濃度10mg/ml。
　　1.5以上各組每組各12例髖關節(jié)。
　　2.動物髖臼組織學及分子生物學實驗。
　　2.1制作髖臼軟骨復合體整體組織石蠟切片(冠狀面，附帶少量骨組織，充分展示

5、其三維立體結構)，部分上述切片使用番紅O-快綠方法染色，觀察各組髖臼大體形態(tài)學變化。
　　2.2免疫組化顯示軟骨細胞中pthrp（甲狀旁腺相關肽）在髖臼軟骨復合體中的變化。
　　2.3免疫組化顯示各區(qū)骺板內(nèi)Brdu標記的處于有絲分裂期軟骨細胞的分布.，應用tunel法檢測雙下肢伸直襁褓體位下骺板軟骨細胞的凋亡。
　　結果：雙下肢伸直襁褓體位下大鼠模型形態(tài)學觀察結果
　　下肢伸直襁褓體位動物模型下大鼠髖臼生長發(fā)育發(fā)

6、生改變，實驗組髖臼與對照組髖臼相比外形上發(fā)生顯著改變，實驗組有假臼形成，且實驗組髖臼與對照組髖臼相比邊緣不整，變淺變薄。番紅O-快綠染色觀察實驗組髖臼軟骨與對照組相比各支寬度增加，細胞排列紊亂，粗糙。
　　雙下肢伸直襁褓體位下大鼠髖臼軟骨細胞pthrp（甲狀旁腺相關肽）的表達結果實驗組pthrp陽性細胞表達于髖臼軟骨復合體的髂骨支、恥骨支、坐骨各支肥大區(qū)，但比對照組高（p<0.01），pthrp陽性細胞數(shù)3天組>6天組>9天組。雙

7、下肢伸直襁褓體位下brdu標識大鼠髖臼軟骨細胞增殖及大鼠髖臼軟骨細胞凋亡的結果
　　Brdu:對照組髖臼軟骨恥骨支、髂恥骨側、坐骨支增殖區(qū)陽性細胞表達明顯高于實驗組（p<0.01）。實驗組的髖臼軟骨恥骨支、髂恥骨側增殖區(qū)陽性細胞個數(shù)3天組<6天組<9天組。
　　凋亡：實驗組髖臼軟骨復合體肥大區(qū)凋亡細胞較對照組明顯減少，增殖區(qū)和靜止區(qū)凋亡實驗組較對照組明顯增多（p<0.01）。實驗組的髖臼軟骨復合體增殖區(qū)和肥大區(qū)凋亡細胞個數(shù)3