大鼠雙下肢擠壓傷模型生化指標(biāo)與病理變化分析.pdf

1、目的:探討實驗用大鼠在相同重量擠壓條件下，經(jīng)歷不同擠壓時間，并在解除擠壓后特定時間內(nèi)，缺血組織血液再灌注后分別對物理、病理、生化等指標(biāo)的不同影響，并根據(jù)指標(biāo)變化判斷此擠壓傷綜合征動物模型的成功與否。
　　方法:實驗采用某機械公司生產(chǎn)的大鼠雙下肢擠壓傷模具，按實驗?zāi)康呐渲昧舜笫蠊潭ㄅ_、連接柱以及承重板等。采用隨機數(shù)字法，將48只健康Sprague-Dawley(SD)大鼠隨機分為實驗組（n=40只）和對照組（n=8只）。將實驗組大鼠

2、固定后，將10kg重的標(biāo)準(zhǔn)砝碼一次性瞬間加于承重板，按照預(yù)設(shè)定的時間持續(xù)進行壓迫。實驗過程中大鼠不給予進食、飲水，不作麻醉，正常呼吸空氣。對照組大鼠不作任何處理。實驗組中，各取8只大鼠分別擠壓3、6、12、24、48 h，共40只，肉眼觀察SD大鼠的存活與雙下肢活動，通過擠壓傷模具的排泄孔觀察大鼠有無血尿發(fā)生。大體觀察后，在解除壓迫后4h將各時間點實驗組大鼠在不作麻醉的情況下，用硬質(zhì)長頸玻璃滴管（長3～4cm、毛細管內(nèi)徑0.5～1.0m

3、m）直接通過大鼠眼內(nèi)眥眼眶靜脈叢采血約2～3ml后，離心機(2000rpm)離心20min，接著將上層血清吸出，用全自動生化分析儀檢測以下生化指標(biāo):反映心肌損傷指標(biāo)的CK含量，反映肝功能指標(biāo)的ALT和AST含量和反映腎功能指標(biāo)的K+、Cr、BUN含量。對照組的采血和檢測方法同實驗組。SD大鼠眼內(nèi)眥采血后即做斷頸處死處理，取處死大鼠腎臟、心臟和受壓部位肌肉等組織標(biāo)本，將取材后的標(biāo)本固定（4％多聚甲醛緩沖液），并通過修剪、脫脂、石蠟包埋、5

4、um切片，蘇木精-伊紅（HE）染色等處理，將染色后肌肉、腎臟、心臟組織切片在x200光鏡下觀察其病理改變。
　　結(jié)果:實驗組大鼠解除壓迫之后，雙下肢明顯腫脹，不能如擠壓前正?；顒?。受壓部位肌肉組織解剖后可見肌肉水腫，顏色蒼白，肌肉的顏色隨著擠壓時間的延長漸呈暗紅色，并滲出淡紅色液體。實驗組擠壓3h大鼠未發(fā)生血尿，6h有2只(25.0％)、12h有3只(37.5％)、24h有3只(37.5％)、48h有5只(62.5％)發(fā)生血尿。(

5、x2=7.52，P＞0.05)。指標(biāo)Cr，K+的組間比較均無統(tǒng)計學(xué)差異（均P＞0.05）;實驗組3h、6h、24h、48h亞組ALT，各時間點亞組的AST，在3h、24h、48h亞組的BUN，以及24h、48h業(yè)組的CK均顯著高于對照組(均P＜0.05)。壓迫解除4小時后，各組受壓卜肢腫脹程度不同，用腫脹最嚴重部位的周徑作為組間比較標(biāo)準(zhǔn)，各組間均未出現(xiàn)統(tǒng)計學(xué)差異（均P＞0.05）。對照組:細胞完整，呈現(xiàn)正常的肌肉纖維結(jié)構(gòu)，橫紋紋理清晰。

6、實驗組受壓的局部肌肉組織發(fā)生病理學(xué)改變:3h組血管擴張并發(fā)生充血，受壓肌肉組織出現(xiàn)輕度水腫，部分肌纖維表現(xiàn)為輕度腫脹及分離;24h組局部受壓肌肉可見肌纖維明顯腫脹，橫紋紋理模糊甚至消失，并呈現(xiàn)局灶性或彌漫性壞死;48 h組局部受壓肌肉肌纖維間質(zhì)水腫，炎性細胞浸潤明顯，部分肌纖維發(fā)生斷裂或碎裂，橫紋、細胞核消失，細胞質(zhì)呈勻質(zhì)化。對照組:鏡下腎小管的上皮細胞完整，管腔中未見管型;腎小球結(jié)構(gòu)正常。實驗組鏡下腎臟組織發(fā)生病理學(xué)改變:3h組腎小球

7、腫脹充血，間質(zhì)中毛細血管發(fā)生擴張和充血，有紅細胞積聚在部分毛細血管內(nèi)。擠壓12h組未見腎小球結(jié)構(gòu)，腎小管間存在散在出血;24h組可見毛細血管擴張充血;48h組鏡下可見腎小管上皮細胞發(fā)生水腫、脫落、壞死，壞死改變最明顯部位為集合管和髓袢升段遠曲小管，管型物質(zhì)（細胞成分、均質(zhì)物質(zhì)等）亦在大部分遠曲小管中出現(xiàn)。對照組:心肌細胞完整，纖維結(jié)構(gòu)正常，橫紋紋理清晰。實驗組心肌病理學(xué)鏡下未見明顯改變:各時間點心肌結(jié)構(gòu)與對照組相比無明顯變化。