楊樹(shù)擴(kuò)張蛋白PtEXP1基因的克隆及其轉(zhuǎn)基因研究.pdf

1、木材形成是一個(gè)復(fù)雜的生物學(xué)過(guò)程，是維管形成層生長(zhǎng)和分化出次生組織的結(jié)果。研究維管木質(zhì)部發(fā)育的分子基礎(chǔ)，即找出木材形成過(guò)程的關(guān)鍵調(diào)控基因，進(jìn)而有目的改變這些基因的表達(dá)，對(duì)提高林木的生長(zhǎng)速率，改良林木的木材性狀具有重要意義。 擴(kuò)張蛋白(expansin)是一種已經(jīng)確定的細(xì)胞壁松弛因子，具有伸展細(xì)胞壁、促進(jìn)細(xì)胞分化的功能。為探討擴(kuò)張蛋白在木材形成中的功能、表達(dá)調(diào)控、作用機(jī)制及其在基因工程遺傳改良中的應(yīng)用前景，從而為進(jìn)一步研究基因工程改

2、良樹(shù)木材性提供理論基礎(chǔ)和基因資源。本文以毛白楊形成層區(qū)域擴(kuò)張蛋白PtEXP1基因?yàn)檠芯繉?duì)象，開(kāi)展了擴(kuò)張蛋白的基因工程研究工作，主要取得以下研究成果： 1.以毛白楊(PopulustomentosaCarr.)為材料，利用RT-PCR法從樹(shù)干形成層區(qū)域中成功克隆出可能與木質(zhì)部細(xì)胞分化相關(guān)的基因PtEXP1的全長(zhǎng)cDNA片段，并成功將該片段連接到pGEM-T載體中。 2.利用雙元植物表達(dá)載體PBI121，將基因PtEXP1的

3、全長(zhǎng)cDNA片段776bp正向插入載體CaMV35S啟動(dòng)子后，構(gòu)建了該基因的正義植物表達(dá)載體PBI121-PtEXP1，并成功轉(zhuǎn)入根癌農(nóng)桿菌GV3101中。 3.應(yīng)用在銀腺楊(P.alba×P.glandulossa)84K上建立的高效遺傳轉(zhuǎn)化體系，通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)的葉盤(pán)法進(jìn)行了PtEXP1基因的遺傳轉(zhuǎn)化，并獲得了經(jīng)抗Kan抗性生根篩選的正義表達(dá)PtEXP1基因的轉(zhuǎn)基因植株。 4.利用PCR擴(kuò)增檢測(cè)經(jīng)抗Kan抗性生根初步篩