兩種植物NPR1基因的克隆及其對(duì)楊樹(shù)轉(zhuǎn)化的研究.pdf

1、楊樹(shù)是世界上中緯度地區(qū)廣泛栽培的重要樹(shù)種，然而楊樹(shù)的病害，特別是楊樹(shù)的潰瘍病，葉銹病和黑斑病，嚴(yán)重影響了楊樹(shù)的生長(zhǎng)發(fā)育，造成了較大的經(jīng)濟(jì)損失。系統(tǒng)獲得性抗性(systemic acquired resistance，SAR)，亦稱廣譜抗性。植物產(chǎn)生SAR后，能在較長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)保持對(duì)多種病原菌的增強(qiáng)抗性。通過(guò)調(diào)節(jié)SAR反應(yīng)來(lái)獲得廣譜抗病性的途徑極具發(fā)展前景。近年來(lái)，大量的實(shí)驗(yàn)證明擬南芥AtNPR1基因在擬南芥中調(diào)控著SAR反應(yīng)，過(guò)量表達(dá)AtN

2、PR1基因可以使擬南芥產(chǎn)生SAR反應(yīng)，同時(shí)對(duì)多種植物病原菌的抗性都有了顯著的提高。
　　 本文以中林2001楊樹(shù)品種葉片為外植體，選用了6-BA和NAA不同激素濃度的6個(gè)處理，篩選楊樹(shù)葉片分化的最佳培養(yǎng)基配方；克隆了擬南芥AtNPR1基因，并構(gòu)建了表達(dá)載體pBI121+AtNPR1，開(kāi)展農(nóng)桿菌介導(dǎo)的楊樹(shù)遺傳轉(zhuǎn)化，并對(duì)轉(zhuǎn)化植株進(jìn)行了抗生素篩選和PCR分子鑒定；同時(shí)，采用生物信息學(xué)的方法分析了楊樹(shù)NPR類型的基因，獲得了候選基因，并

3、克隆楊樹(shù)PtNPR1基因。獲得了以下主要結(jié)果：
　　 1、進(jìn)行了中林2001楊葉片直接誘導(dǎo)不定芽的研究，獲得葉片分化的最佳培養(yǎng)基配方為MS+NAA0.5mg/L+6-BA1.0mg/L+2％蔗糖。
　　 2、克隆了擬南芥AtNPR1基因，構(gòu)建含CaMV35S組成型啟動(dòng)子和卡那霉素篩選基因的表達(dá)載體pBI121+AtNPR1，并利用凍融法將其導(dǎo)入農(nóng)桿菌EHA105中。
　　 3、利用葉盤(pán)法將表達(dá)載體導(dǎo)入南林95楊中

4、，獲得了經(jīng)Kan抗性篩選的轉(zhuǎn)基因植株5株，PCR分子鑒定獲得了3株轉(zhuǎn)化株。
　　 4、采用生物信息學(xué)的方法，在全基因組水平上系統(tǒng)分析了楊樹(shù)NPR類型的基因，從中獲得了8條候選基因序列，進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)其中一條基因序列符合NPR類型基因的結(jié)構(gòu)特征，并克隆得到該基因序列，同源比對(duì)分析結(jié)果。
　　 本研究篩選中林2001楊葉片直接誘導(dǎo)分化成芽的最佳培養(yǎng)基配方；克隆擬南芥AtNPR1基因并構(gòu)建了pBI121+AtNPR1表達(dá)載體，