慢性腎衰患者腸道微生態(tài)改變.pdf

1、目的：通過觀察腎衰狀態(tài)下腸道菌群變化，探索慢性腎衰腸道細(xì)菌療法的候選菌及其適宜腸道環(huán)境。 方法： 1、實(shí)驗(yàn)對(duì)象及分組：慢性腎衰患者組及正常對(duì)照組各26例；并將慢性腎衰患者組分別按原發(fā)病、病程、血尿毒素濃度是否行規(guī)律透析及使用抗生素情況分4個(gè)亞組。 2、標(biāo)本：制備無菌標(biāo)本管內(nèi)置3ml無菌生理鹽水并稱重。無菌操作取新鮮糞便若干，混勻于制備好的標(biāo)本管生理鹽水中，并稱重。 3、處理：無菌操作室中取100ml.標(biāo)本

2、，按十倍稀釋法稀釋6倍。 4、點(diǎn)樣：無菌操作室中用滴注法將不同稀釋梯度標(biāo)本各10ul接種于4種高選擇性培養(yǎng)基(LBS、BS、TTC及EMB瓊脂平板)。 5、孵育：LBS及BS瓊脂平板置于37℃厭氧培養(yǎng)箱48小時(shí)；TTC及EMB瓊脂平板置于37℃生化培養(yǎng)箱24小時(shí)。 6、菌群鑒定：觀察4種平板生長菌落的形態(tài)、菌落大小、色澤、邊緣，并取典型菌落經(jīng)革蘭染色，光鏡下觀察細(xì)菌形態(tài)、大小、染色性。 7、菌群計(jì)數(shù)：記錄

3、4種平板上不同稀釋梯度生長的菌落數(shù)量。細(xì)菌培養(yǎng)結(jié)果以每克糞便菌量的log10n表示。 結(jié)果：(X±SD，n=10) 1、慢性腎衰組(A)與正常對(duì)照組(B) 1)每克糞便含乳酸桿菌菌落數(shù)：A組6.67±1.61、B組6.81± 1.60；A組較B組無差別(P=0.0.839)。 2)每克糞便含雙岐桿菌數(shù)菌落數(shù)：A組8.49±1.12、B組7.83±0.88；A組較B增多(P=0.011)。 3)每克

4、糞便含腸球菌數(shù)菌落數(shù)：A組5.75±2.00、B組5.67±1.24；A組較B組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.560)。 4)每克糞便含大腸桿菌數(shù)菌落數(shù)：A組7.63±2.06；B組6.55±1.87；A組較B組增加(P=0.004) 2、原發(fā)病亞組菌群分析 慢性腎小球腎炎組(A)；非慢性腎小球腎炎組(B) 1)每克糞便含乳酸桿菌數(shù)菌落數(shù)：A組6.69±1.58、B組6.64±1.89；兩組乳酸桿菌無差別(P=0

5、.914)。 2)每克糞便含雙岐桿菌數(shù)菌落數(shù)：A組8.23±1.33、B組8.77±0.81；兩組雙岐桿菌無差別(P=0.487)。 3)每克糞便含腸球菌數(shù)菌落數(shù)：A組5.50±2.54、B組6.00±1.41；兩組腸球菌無差別(P=1.000)。 4)每克糞便含大腸桿菌數(shù)菌落數(shù)：A組7.65±1.38、B組7.62±2.81：兩組大腸桿菌無差別P=0.313 3、病程亞組菌群分析 病程<1年組(

6、A)；病程1-10年組(B)；病程>10年組(C) 1)每克糞便含乳酸桿菌菌落數(shù)：A組5.91±1.45、B組7.97±1.02、C組5.24±0.00；病程對(duì)慢性腎衰患者腸道乳酸桿菌生長無影響(P=0.098)。 2)每克糞便含雙岐桿菌菌落數(shù)：A組8.17±1.26、B組9.03±0.45、C組8.34±1.57；病程對(duì)慢性腎衰患者腸道雙歧桿菌生長無影響(P=0.443)。 3)每克糞便含腸球菌菌落數(shù)：A組5.

7、24±2.30、B組6.57±1.50、C組4.13±0.00；病程對(duì)慢性腎衰患者腸道腸球菌生長無影響(P=0.218)。 4)每克糞便含大腸桿菌菌落數(shù)：A組7.38±1.38、B組7.52±3.08、C組8.97±0.20；慢性腎衰患者腸道大腸桿菌隨病程增長而增多(P=0.045)。 4、血尿毒素亞組菌群分析 尿素氮(BUN)：BUN9-20mmol/L組(A)：BUN>20mmol/L組(B) 1)每

8、克糞便含乳酸桿菌菌落數(shù)： A組5.54±1.01、B組7.42±1.53；慢性腎衰患者腸道乳酸桿菌生長與血尿素氮濃度無關(guān)系(P=0.114)。 2)每克糞便含雙岐桿菌菌落數(shù)：A組8.58±1.26、B組8.35±0.90；慢性腎衰患者腸道雙歧桿菌與血肌酐濃度無關(guān)系(P=0.277)。 3)每克糞便含腸球菌菌落數(shù)：A組5.70±2.52、B組5.82±1.23；慢性腎衰患者腸道腸球菌生長與血尿素氮濃度無關(guān)系(P=0.758

9、)。 4)每克糞便含大腸桿菌菌落數(shù)：A組7.25±2.69、B組8.05±1.01；慢性腎衰患者腸道大腸桿菌生長與血尿素氮濃度無關(guān)系(P=0.742)。 肌酐(CR)：CR<445umol/L組(A)；CR445-800umol/L組；(B)CR>800umol/L(C) 5)每克糞便含乳酸桿菌菌落數(shù)：A組6.95±0.00、B組6.26±1.95、C組6.94±1.63；慢性腎衰患者腸道乳酸桿菌生長與血肌酐濃度

10、無關(guān)系(P=0.815)。 6)每克糞便含雙岐桿菌菌落數(shù)：A組9.70±0.64、B組8.73±0.97、C組8.10±1.16；慢性腎衰患者腸道雙歧桿菌與血肌酐濃度呈負(fù)相關(guān)(P=0.027，Spearman相關(guān)系數(shù)為-0.462，P=0.027)。 7)每克糞便含腸球菌菌落數(shù)：A組0、B組5.60±2.98、C組5.83±1.31；慢性腎衰患者腸道腸球菌生長與血及酐濃度無關(guān)系(P=0.515)。 8)每克糞便含

11、大腸桿菌菌落數(shù)：A組8.78±0.00、B組7.50±2.77、C組7.65±1.43；慢性腎衰患者腸道大腸桿菌生長與血肌酐濃度無關(guān)系(P=0.559)。 尿酸(UA)460-600umol/L組(A)；UA>600umol/L(B) 9)每克糞便含乳酸桿菌菌落數(shù)：A組7.12±2.11、B6.29±0.96；慢性腎衰患者腸道乳酸桿菌生長與血尿酸濃度無關(guān)系(P=0.786)。 10)每克糞便含雙岐桿菌菌落數(shù)(lo

12、gl0)：A組8.11±1.15、B組8.93±0.69；慢性腎衰患者腸道雙歧桿菌生長與血肌酐濃度無差別(P=0.102)。 11)每克糞便含腸球菌菌落數(shù)：A組6.11±1.34、B組4.82±2.60；慢性腎衰患者腸道腸球菌生長與血尿酸濃度無關(guān)系(P=0.491)。 12)每克糞便含大腸桿菌菌落數(shù)：A組7.14±2.48、B組8.22±0.91；慢性腎衰患者腸道大腸桿菌生長與血尿酸濃度無關(guān)系(P=0.718)。

13、 5、透析亞組菌群分析 1)每克糞便含乳酸桿菌菌落數(shù)：透析組7.21±1.84、未透析組6.30±1.49；透析對(duì)慢性腎衰患者腸道乳酸桿菌生長無影響(P=0.476)。 2)每克糞便含雙岐桿菌菌落數(shù)：透析組7.93±0.96、未透析組8.61±1.13；規(guī)律行透析治療的慢性腎衰患者腸道雙歧桿菌無差別(P=0.138)。 3)每克糞便含腸球菌菌落數(shù)：透析組6.21±0.40、未透析組5.65±2.22；透析對(duì)慢性腎

14、衰患者腸道腸球菌生長無影響(P=0.882)。 4)每克糞便含大腸桿菌菌落數(shù)：透析組8.36±1.19、未透析組7.43±2.23；透析對(duì)慢性腎衰患者腸道大腸桿菌生長無影響(P=0.290)。 6、抗生素亞組菌群分析 1)每克糞便含乳酸桿菌菌落數(shù)：抗生素組5.87±0.94、無抗生素組7.00±1.77(P=0.517)。 2)每克糞便含雙岐桿菌菌落數(shù)：抗生素組8.70±1.40、無抗生素組8.43±1.

15、07(P=0.257)。 3)每克糞便含腸球菌菌落數(shù)：抗生素組6.7l±0.00、無抗生素組5.79±2.05(P=0.500)。 4)每克糞便含大腸桿菌菌落數(shù)：抗生素組8.44±0.52、無抗生素組7.46±2.23(P=0.456)。 在本實(shí)驗(yàn)入選的慢性腎衰患者中有無靜脈使用抗生素對(duì)本實(shí)驗(yàn)組患者腸道各菌群均無影響。 結(jié)論： 1、慢性腎衰狀態(tài)下患者腸道雙歧桿菌及大腸桿菌增多。 2、慢性腎