汗法調(diào)節(jié)腸道微生態(tài)治療慢性腎臟病的研究.pdf

1、目的：
　　觀察不同劑量麻黃湯對(duì)大鼠慢性腎臟病(CKD)的治療作用及機(jī)制。
　　方法：
　　采用隨機(jī)數(shù)字表法，將80只大鼠分為正常組、模型組、阿托品組、毛果蕓香堿組、纈沙坦組、麻黃湯高劑量組、麻黃湯中劑量組、麻黃湯低劑量組。正常大鼠予以生理鹽水一次性尾靜脈注射，其余大鼠一次性尾靜脈注射阿霉素（4mg/kg），然后正常組再予以生理鹽水灌胃，其余大鼠腺嘌呤灌胃（200mg/kg/d）連續(xù)灌胃建立慢性腎臟疾病大鼠模型。建模成

2、功后，正常和模型大鼠予以同等劑量生理鹽水灌胃。建模成功后，毛果蕓香堿組予以毛果蕓香堿5mg/kg/d灌胃，阿托品組予以阿托品0.1mg/kg/d腹腔注射，纈沙坦組予以纈沙坦13mg/kg/d灌胃，麻黃湯高劑量組予以麻黃湯1.2g/kg/d灌胃，麻黃湯中劑量組予以麻黃湯0.6g/kg/d灌胃，麻黃湯低劑量組予以麻黃湯0.3 g/kg/d灌胃。藥物干預(yù)4周后收集血、尿、腳掌皮膚、腎臟、腸道等組織標(biāo)本，用于檢測(cè)腎功能情況，病理染色觀察腎臟、腸

3、道、汗腺的形態(tài)變化以及酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)檢測(cè)血清中白介素-6（IL-6)和腫瘤壞死因子-α（TNF-α）含量，蛋白質(zhì)印跡（WB）檢測(cè)腎臟組織轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子（TGF-β）和核因子-κB(NF-κB)表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　（1）汗腺的改變：正常汗腺未見明顯改變，模型亦未見明顯改變，與模型比較，使用了麻黃湯高、中、低劑量及毛果蕓香堿大鼠汗腺明顯擴(kuò)張，阿托品大鼠汗腺明顯收縮，纈沙坦未見明顯改變。
　?。?）腎臟結(jié)構(gòu)與功能的變化：

4、與正常大鼠比較，模型24h尿蛋白定量，血肌酐，尿素氮均明顯升高（P＜0.05）。加用藥物后，麻黃湯高、中、低劑量各項(xiàng)指標(biāo)均降低，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。而毛果蕓香堿、阿托品各項(xiàng)指標(biāo)改變不明顯，纈沙坦干預(yù)大鼠24h尿蛋白明顯降低（P＜0.05），血肌酐、尿素氮未見明顯改變。Masson染色及HE染色均提示：與正常比較，模型腎小球明顯硬化、固縮，小管擴(kuò)張明顯，炎癥細(xì)胞大量浸潤(rùn)，大面積膠原纖維染色明顯。模型腎臟組織病理評(píng)分及腎間質(zhì)纖維

5、化面積與正常比較均明顯升高（P＜0.05）。與模型比較，麻黃湯高、中、低劑量病理評(píng)分和纖維化面積均有改善（P＜0.05）。毛果蕓香堿、阿托品、纈沙坦病理改變及纖維化面積與模型比較無(wú)明顯差異。Western-blot檢測(cè) TGF-β及 NF-κB均提示：正常幾乎不表達(dá)，模型與正常比較，表達(dá)明顯增多（P＜0.05）。與模型比較，麻黃湯高、中、低劑量TGF-β及NF-κB表達(dá)均下降，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。毛果蕓香堿、阿托品、纈沙坦與

6、模型比較改變不明顯。
　?。?）腸粘膜屏障結(jié)構(gòu)：與正常比較，模型腸道絨毛倒伏，刷狀緣不連續(xù)，上皮糜爛脫落，腸粘膜固有層大量炎性細(xì)胞侵潤(rùn)，出現(xiàn)固有層水腫。模型腸粘膜病理評(píng)分與正常比較明顯升高。麻黃湯高、中、低劑量腸粘膜病理評(píng)分與模型比較均有不同程度的降低（P＜0.05）。毛果蕓香堿、阿托品、纈沙坦腸粘膜病理評(píng)分未見明顯改變。
　?。?）系統(tǒng)炎癥與腸道局部免疫：模型血清IL-6、TNF-α與正常比較均明顯升高（P＜0.05）。與

7、模型比較，麻黃湯高、中、低劑量的IL-6、TNF-α均有明顯降低（P＜0.05），毛果蕓香堿、阿托品、纈沙坦與模型比較未見明顯改變。免疫組化結(jié)果顯示，模型大鼠腸粘膜與正常比較，CD4+T淋巴細(xì)胞表達(dá)明顯減低，而CD8+T淋巴細(xì)胞表達(dá)則增加明顯（P＜0.05）。麻黃湯高、中、低劑量與模型相比，CD4+T淋巴細(xì)胞表達(dá)增加，而CD8+T淋巴細(xì)胞表達(dá)則明顯減少（P＜0.05）。毛果蕓香堿、阿托品、纈沙坦的CD4+T淋巴細(xì)胞及CD8+T淋巴細(xì)胞表