人體小腸微生態(tài)研究及肝移植受者腸道微生態(tài)研究.pdf

1、棲息在人類的微生物的數(shù)量達(dá)100萬(wàn)億個(gè)，超過人體細(xì)胞和生殖細(xì)胞的10倍，被稱為是人類的“第二基因組”，構(gòu)成了人體的一個(gè)代謝器官，參與機(jī)體的代謝，腸道微生物作為體內(nèi)菌群最多的共生生態(tài)系統(tǒng)影響著人類的健康、營(yíng)養(yǎng)及生長(zhǎng)發(fā)育。近年來(lái)，隨著非培養(yǎng)技術(shù)的進(jìn)步，對(duì)人類腸道微生態(tài)的研究及其對(duì)健康與疾病影響的研究呈現(xiàn)空前的增長(zhǎng)。越來(lái)越多的研究表明，腸道微生態(tài)的失衡與許多疾病如肥胖、糖尿病、炎性腸病、過敏性疾病等均有關(guān)。然而寄居在人類腸道的微生物達(dá)上千種，

2、我們所了解的只是其中的一小部分，因此進(jìn)一步研究腸道微生物的特征構(gòu)成，尤其是對(duì)既往研究未曾涉及的腸道標(biāo)本以及特殊人群腸道微生態(tài)的變化將有助于我們更為深入的了解微生物在人類健康與疾病中的作用。
　　本研究第一部分對(duì)10位器官捐獻(xiàn)者的小腸不同部位的樣本進(jìn)行了研究，在無(wú)菌狀態(tài)下獲取空腸上段、空回腸交界處及回腸末端三個(gè)部位的腸內(nèi)容物，提取細(xì)菌DNA，應(yīng)用454焦磷酸測(cè)序技術(shù)，對(duì)小腸內(nèi)菌群結(jié)構(gòu)特征進(jìn)行了詳細(xì)的分析，明確和比較了小腸不同部位腸道

3、菌群多樣性及其組成結(jié)構(gòu)，共獲得69506條高質(zhì)量的16S rRNA基因V5-V6區(qū)序列，所有序列依據(jù)97％相似度水平劃分為518個(gè)分類操作單元(operational taxonomic units，OTU)，在細(xì)菌門分類水平豐度較高的有6個(gè)已知的門類和一個(gè)未分類的門類，包括變形菌門（Proteobacteria）、厚壁菌門（Firmicutes）、放線菌門(Actinobacteria)、TM7門、梭桿菌門（Fusobacteria）

4、，擬桿菌門（Bacteroidetes）上述門類細(xì)菌覆蓋了小腸內(nèi)85％的細(xì)菌微生物，另外檢測(cè)到7個(gè)豐度較低的細(xì)菌門類。通過研究表明，人體小腸微生態(tài)呈現(xiàn)與生理解剖部位相關(guān)的特征性改變，空腸上段與空回腸交界處小腸微生態(tài)多樣性無(wú)明顯差異，空腸上段、空回腸交界處小腸微生態(tài)多樣性與回腸末段小腸微生態(tài)多樣性相比較存在顯著差異。
　　本研究第二部分對(duì)肝移植受者腸道微生態(tài)進(jìn)行了研究，共收集47份糞便標(biāo)本，包括健康對(duì)照組(n=15)，肝移植術(shù)前組(

5、n=17)、肝移植術(shù)后組(n=15)、提取糞便基因組DNA，同樣應(yīng)用454焦磷酸測(cè)序技術(shù)，共獲得527735條萬(wàn)條高質(zhì)量的16 S-rRNA基因序列，1911個(gè)OTU。分析結(jié)果提示在肝移植術(shù)前、術(shù)后及正常對(duì)照者的所有樣本在門類水平分屬12個(gè)門類，包括厚壁菌門（Firmicutes）、變形菌門（Proteobacteria）、放線菌門（Actinobacteria）、擬桿菌門（Bacteroidetes）、TM7門、藍(lán)藻菌門(Cyanob

6、acteria)、梭桿菌門（Fusobacteria）、疣微菌門（Verrucomicrobia）、柔膜菌門（Tenericutes）、Synergistetes門，古細(xì)菌(Archaea)以及未分類細(xì)菌。其中厚壁菌門、擬桿菌門和變形菌門占所有細(xì)菌的92％。在本研究中肝移植術(shù)前患者與健康對(duì)照者相比，糞便中變形菌門（Proteobacteria）豐度增加，其中主要是以腸桿菌科（Enterobacteriaceae）明顯增加;擬桿菌門（Ba

7、cteroidetes）中的普沃氏菌屬（Prevotella）豐度明顯降低，擬桿菌屬（Bacteroides）無(wú)明顯變化。肝移植術(shù)后患者的與術(shù)前相比，變形菌門（Proteobacteria）豐度明顯減少，其中主要是腸桿菌科（Enterobacteriaceae）減少，而厚壁菌門的豐度增加。肝移植術(shù)前術(shù)后患者與健康人群之間腸道微生態(tài)均存在差異，而肝移植患者術(shù)前術(shù)后變化更為明顯。
　　本研究通過對(duì)器官捐獻(xiàn)者小腸微生態(tài)的研究，初次用Ba