不同劑量地西他濱對調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的影響.pdf

1、目的：探討不同劑量甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑地西他濱(decitabine，Aza)通過調(diào)節(jié)Foxp3基因表達(dá)在體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)中對CD4+CD25+Treg細(xì)胞變化的影響，尋找體內(nèi)外Aza影響CD4+CD25+Treg變化的合適劑量。
　　方法：(1)體外實(shí)驗(yàn)部分，利用密度梯度離心法分離純化C57BL/6(H-2b)小鼠脾臟單個(gè)核細(xì)胞，聯(lián)合使用抗小鼠CD3單克隆抗體、抗小鼠CD28單克隆抗體、IL-2、TGF-β及不同劑量的Aza，進(jìn)行淋巴細(xì)胞

2、培養(yǎng)，觀察不同劑量的Aza對培養(yǎng)體系的影響，以流式細(xì)胞技術(shù)檢測培養(yǎng)體系CD4+CD25+Foxp3+Treg比例，實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測培養(yǎng)體系Foxp3mRNA表達(dá)水平。(2)體內(nèi)實(shí)驗(yàn)部分，按不同分組經(jīng)C57BL/6(H-2b)小鼠陰莖背靜脈注射不同劑量的Aza，觀察不同劑量的Aza對小鼠機(jī)體的影響，以流式細(xì)胞技術(shù)檢測外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg比例，實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測脾臟Foxp3mRNA表達(dá)水平。
　　結(jié)

3、果：(1)體外實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，①聯(lián)合使用抗小鼠CD3單克隆抗體、抗小鼠CD28單克隆抗體、IL-2、TGF-β及Aza能夠使小鼠脾臟淋巴細(xì)胞培養(yǎng)體系中初始CD4+CD25-T細(xì)胞分化為CD4+CD25+Treg細(xì)胞。同時(shí)Foxp3mRNA表達(dá)水平上升。②不同劑量Aza誘導(dǎo)初始CD4+CD25+T細(xì)胞分化為CD4+CD25+Foxp3+Treg細(xì)胞的數(shù)量不同。Foxp3mRNA表達(dá)水平也不同。③濃度為5uM Aza組淋巴細(xì)胞培養(yǎng)體系中CD4+

4、CD25+Foxp3+Treg比例和Foxp3mRNA表達(dá)水平與其他濃度組相比升高最明顯，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。(2)體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，①Aza使經(jīng)陰莖背靜脈注射給藥后第7天小鼠外周血CD4+CD25+Treg細(xì)胞數(shù)量增加，脾臟中Foxp3mRNA表達(dá)水平上升。②不同劑量Aza對小鼠外周血CD4+CD25+Treg細(xì)胞數(shù)量和脾臟中Foxp3mRNA表達(dá)水平影響不同。③按4ug/g。體重/day劑量給予Aza組對小鼠外周血C

5、D4+CD25+Foxp3+Treg比例和脾臟Foxp3mRNA表達(dá)水平的影響與其他實(shí)驗(yàn)組相比升高最明顯，且均有顯著性差異(P<0.05)。
　　結(jié)論：在本實(shí)驗(yàn)中，無論是體內(nèi)還是體外，甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑5-氮雜-2’-脫氧胞苷(5-aza-2’-deoxycytidine，Aza)即地西他濱(Decitabine)均可誘導(dǎo)初始CD4+CD25-T細(xì)胞分化為CD4+CD25+Treg且Foxp3mRNA表達(dá)水平上調(diào)，但是不同劑量Aza