荷瘤鼠髓樣抑制細(xì)胞比例和免疫功能的變化及吉西他濱的調(diào)節(jié)作用.pdf

1、目的：研究荷H22肝癌昆明鼠的外周血、脾和骨髓中髓樣抑制細(xì)胞(MSCs)和CD4+、CD8+細(xì)胞比例的變化，及在吉西他濱作用下兩者變化規(guī)律的改變，探討髓樣抑制細(xì)胞(MSCs)的變化對(duì)腫瘤和機(jī)體免疫功能的作用。 方法： 昆明鼠腹水模型培養(yǎng)肝癌H22細(xì)胞，每只鼠皮下接種5×106個(gè)細(xì)胞建立皮下腫瘤模型。皮下接種后，隨機(jī)分為3組：生理鹽水組、吉西他濱高劑量組(80mg/kg)和吉西他濱低劑量組(60mg/kg)。于接種后第7天

2、，腹腔內(nèi)注入吉西他濱鹽生理鹽水溶液一次給藥，對(duì)照組注入同體積生理鹽水。定期測(cè)量腫瘤的長(zhǎng)和寬，并記錄生存期。于第0、7、14、21天，每組隨機(jī)處死3只，剝離腫瘤、稱瘤質(zhì)量，計(jì)算抑瘤率；分離外周血、脾和骨髓中的單個(gè)核細(xì)胞，CD11b-PE/Gr-1-FITC、CD4-FITC/CD8-PE免疫熒光染色后，流式細(xì)胞儀檢測(cè)MSCs和淋巴細(xì)胞比例。免疫細(xì)胞化學(xué)染色法觀察MSCs的形態(tài)。 結(jié)果： 皮下接種H22后第7、14和21天時(shí)

3、，對(duì)照組腫瘤體積分別為(63.68±17.37)mm3、(6931.96±1648.16)mm3和(11856.80±4053.17)mm3；Gem 60mg/kg組的腫瘤體積分別為(64.80±15.20)mm3、(4739.36±1589.73)mm3(與對(duì)照組比較，P值為0.014。以下P值均是實(shí)驗(yàn)組與同時(shí)間對(duì)照組比較。)和(9520.85±2669.32)mm3(P值為0.299)；吉西他濱80mg/kg組腫瘤體積分別為(65.

4、56±18.58)mm3、(4325.72±2267.73)mm3(P值為0.017)和(6323.15±2000.86)mm3(P值為0.009)。給藥當(dāng)天(即皮下接種后第7天)的腫瘤體積各組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)；對(duì)照組的腫瘤生長(zhǎng)非常迅速；Gem組從第14天開始腫瘤體積就明顯小于對(duì)照組，Gem 80mg/kg組抑制作用更為顯著。在外周血中，皮下接種H22腫瘤細(xì)胞第0、7、14、21天的荷瘤鼠MSCs比例為(5.17±1.80)

5、％、(9.87±0.71)％、(16.28±4.75)％和(13.05±1.74)％，基本呈增加趨勢(shì)；第14、21天時(shí)，Gem 60mg/kg組MSCs比例為(9.18±1.46)％和(9.40±1.73)％，Gem80mg/kg組MSCs比例為(8.86±0.78)％和(8.40±2.21)％，P值分別為0.069和0.062、0.056和0.046。在第21天時(shí)，Gem 80mg/kg組MSCs減少具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

6、 在脾中，第0、7、14、21天MSCs比例分別為(5.61±0.37)％、(8.68±0.73)％、(13.93±0.70)％和(14.12±5.09)％。第14、2l天時(shí)Gem 60mg/kg組MSCs比例為(11.12±1.20)％、(12.55±0.73)％；Gem 80mg/kg組MSCs比例為(8.92±1.53)％、(8.37±0.52)％，P值分別為0.024和0.626、0.0068和0.123?？梢娫谄⒅?，只在

7、早期具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，后期已無差別。 在骨髓中，第0、7、14、21天MSCs比例分別為(26.9±4.2)％、(22.96±1.85)％、(29.4±3.19)％和(22.31±4。56)％。第14、21天時(shí)Gem 60 mg/kg組MSCs比例為(25.47±0.89)％、(20.49±1.99)％；Gem 80mg/kg組MSCs比例為(21.89±3.62)％、(11.97±2.20)％，P值分別為0.10

8、8和0.561，0.054和0.024。在第21天時(shí)，骨髓中MSCs減少在Gem 80mg/kg組具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 第0天外周血中CD4+細(xì)胞的比例為(19.67±3.26)％，CD8+細(xì)胞的比例為(7.50±1.63)％，其CD4/CD8比值為(2.64±0.14)；第7天CD4+、CD8+細(xì)胞和CD4/CD8分別為(4.36±0.39)％、(1.72±0.28)％和(2.57±0.39)。在給藥后第7、14天

9、時(shí)，實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組之間CD4/CD8無明顯差異(P值均大于0.05)。給藥后第7天時(shí)，CD4+、CD8+細(xì)胞在Gem 80mg/kg組顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，第14天時(shí)又恢復(fù)到無差異。 皮下接種H22肝癌細(xì)胞后第7天剖出腫瘤稱重，平均瘤質(zhì)量為(0.50±0.23)g。給藥后第7、14天時(shí)，對(duì)照組平均瘤質(zhì)量為(4.09±1.27)g和(7.99±1.58)g；Gem60mg/kg組平均瘤質(zhì)量為(3.7±1.18)g和(5.

10、71±0.77)g；Gem 80mg/kg組平均瘤質(zhì)量為(2.88±0.72)g和(5.00±0.21)g，后者與對(duì)照組之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.031，P<0.05)。Gem 80mg/kg組在給藥的第7天抑瘤率就達(dá)到了29.58％，第14天時(shí)達(dá)到了37.42％。與對(duì)照組相比，Gem 60mg/kg組延長(zhǎng)小鼠生命約4天(P=0.209，P>0.05)，而Gem 80mg/kg組則延長(zhǎng)了8天(P<0.05，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異)。 結(jié)

11、論： 1、髓樣抑制細(xì)胞隨著腫瘤負(fù)荷的增加，其外周血、脾臟和骨髓中MSCs的比例在增加。 2、高劑量的吉西他濱抑制昆明鼠H22肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)的同時(shí)降低了MSCs的比例，而低劑量的吉西他濱在腫瘤恢復(fù)生長(zhǎng)的時(shí)候，MSCs的數(shù)量也相應(yīng)增加，充分說明MSCs與腫瘤負(fù)荷相關(guān)。 3、實(shí)驗(yàn)組外周血CD4+/CD8+的比均不具有顯著性差異，CD4+、CD8+細(xì)胞的比例也只是在給藥的早期，在高劑量吉西他濱組高于對(duì)照組。似乎MSCs與C