木瓜苷和兒茶素對小鼠細胞免疫功能的調(diào)節(jié)作用.pdf

1、目的： T細胞介導(dǎo)的細胞免疫應(yīng)答在移植物排斥、移植物抗宿主反應(yīng)、自身免疫和腫瘤免疫等方面起重要作用。小鼠遲發(fā)型超敏反應(yīng)(delayed-type hypersensitivity，DTH)是由特異性致敏效應(yīng)T細胞介導(dǎo)的細胞免疫反應(yīng)。本實驗采用2，4-二硝基氯苯(2，4-dinitrochlorobenzene，DNCB)誘導(dǎo)的小鼠DTH反應(yīng)以及環(huán)磷酰胺(cyclophosphamide，Cy)增強或抑制DNCB誘導(dǎo)的小鼠DTH反

2、應(yīng)作為細胞免疫功能異常的模型，從整體、胸腺T細胞增殖以及胸腺T細胞產(chǎn)生的細胞因子等方面觀察木瓜苷(glucosides of Chaenomeles speciosa，GCS)和兒茶素(catechin，Cat)對上述各模型的影響，研究GCS和Cat對細胞免疫的調(diào)節(jié)作用及其部分機制，并探討Cat是否是GCS發(fā)揮作用的主要有效成份之一。 方法： 以DNCB誘導(dǎo)小鼠DTH反應(yīng)，于DNCB致敏前3天腹腔注射(intragper

3、itonealinjection，ip)Cy(250 mg·kg-1)和致敏后立即ip Cy(125 mg·kg-1)分別誘導(dǎo)小鼠增強和抑制的DTH反應(yīng)；于致敏前3天GCS(60，120，240mg·kg-1·d-1)和Cat(30，60，120 mg·kg-1·d-1)灌胃給藥(intragastric administration，ig)(d-3~d4)，連續(xù)7d。用耳腫脹度、胸腺和脾指數(shù)作為整體檢測指標(biāo)；以ConA誘導(dǎo)胸腺T淋巴細

4、胞，觀察不同劑量或濃度的GCS和Cat體內(nèi)外對胸腺T淋巴細胞增殖及其產(chǎn)生的細胞因子IL-2、IL-4的影響。MTT法檢測胸腺T淋巴細胞增殖，ConA誘導(dǎo)的胸腺T淋巴細胞培養(yǎng)上清中IL-2活性檢測采用活化的小鼠胸腺細胞MTT比色結(jié)果： 1.GCS和Cat對正常DTH小鼠細胞免疫功能的影響GCS和Cat對正常小鼠DTH有明顯的抑制作用。GCS(60，120，240 mg·kg-1)，Cat(120 mg·kg-1)能顯著下調(diào)DTH小

5、鼠的耳腫脹；GCS(120，240 mg·kg-1)和Cat(120 mg·kg-1)可顯著下調(diào)DTH小鼠的胸腺及脾臟指數(shù)；GCS(60，120，240mg·kg-1)，Cat(60，120 mg·kg-1)可顯著下調(diào)DTH小鼠胸腺T淋巴細胞增殖反應(yīng)以及產(chǎn)生IL-2的水平，使之接近正常水平。GCS(120，240 mg·kg-1)和Cat(120 mg·kg-1)可顯著上調(diào)DTH小鼠降低的胸腺T淋巴細胞產(chǎn)生IL-4的水平。 體外

6、實驗進一步證實，GCS(12.5~200 μg·ml-1)及Cat(25~200 μg·ml-1)能顯著下調(diào)DTH小鼠胸腺T淋巴細胞增殖反應(yīng)和產(chǎn)生IL-2的水平，GCS(25~200μg·ml-1)及Cat(50~200 μg·ml-1)能顯著上調(diào)DTH小鼠胸腺T淋巴細胞產(chǎn)生IL-4的水平。 2.GCS和Cat對Cy增強的DTH小鼠細胞免疫功能的影響GCS和Cat對Cy增強的小鼠DTH有明顯的抑制作用。GCS(60，120，24

7、0mg·kg-1)和Cat(120 mg·kg-1)能顯著下調(diào)Cy增強的DTH小鼠耳腫脹度；GCS(120，240 mg·kg-1)和Cat(120 mg·kg-1)能顯著下調(diào)Cy增強的DTH小鼠胸腺指數(shù)；GCS(60，120，240 mg·kg-1)和Cat(60，120 mg·kg-1)可顯著下調(diào)Cy增強的DTH小鼠脾指數(shù)；GCS(120，240mg·kg-1)和Cat(60，120 mg·kg-1)可顯著下調(diào)Cy增強的DTH小鼠胸

8、腺T淋巴細胞增殖反應(yīng)；GCS(60，120，240 mg·kg-1)及Cat(30，60，120 mg·kg-1)能顯著下調(diào)Cy增強的DTH小鼠胸腺T淋巴細胞產(chǎn)生IL-2的水平；GCS(120，240 mg·kg-1)及Cat(120 mg·kg-1)能顯著上調(diào)Cy增強的DTH小鼠胸腺T淋巴細胞產(chǎn)生IL-4的水平。 體外實驗進一步證實，GCS(12.5~200 lμg·ml-1)及Cat(25~200 μg·ml-1)能顯著下調(diào)

9、Cy增強的DTH小鼠胸腺T淋巴細胞增殖反應(yīng)和產(chǎn)生IL-2的水平，GCS(25~200 μg·ml-1)及Cat(50~200 μg·ml-1)能顯著上調(diào)Cy增強的DTH小鼠胸腺T淋巴細胞產(chǎn)生IL-4的水平。 3.GCS和Cat對Cy抑制的DTH小鼠細胞免疫功能的影響GCS和Cat對受抑制的小鼠細胞免疫功能有增強作用。GCS(120，240 mg·kg-1)及Cat(60，120 mg·kg-1)能顯著上調(diào)Cy抑制小鼠的耳腫脹度；GCS(

10、60，120，240 mg·kg-1)及Cat(60，120 mg·kg-1)能顯著上調(diào)cy抑制小鼠胸腺指數(shù)和脾指數(shù)；GCS(60，120，240 mg·kg-1)及Cat(60，120 mg·kg-1)能顯著上調(diào)Cy抑制小鼠胸腺T淋巴細胞增殖以及產(chǎn)生IL-2和IL-4的水平。 體外實驗進一步證實，GCS(12.5~200 μg·ml-1)及Cat(25~200 μg·ml-1)能顯著上調(diào)Cy抑制DTH小鼠胸腺T淋巴細胞增殖反應(yīng)

11、和產(chǎn)生的IL-4水平：GCS(12.5~200 μg·ml-1)及Cat(12.5~200 μg·ml-1)能顯著上調(diào)Cy抑制的DTH小鼠胸腺T淋巴細胞產(chǎn)生的IL-2水平。 結(jié)論： GCS和Cat對免疫功能異常的小鼠的細胞免疫具有機能依賴性的雙向免疫調(diào)節(jié)作用，其作用機制可能與調(diào)節(jié)小鼠胸腺T淋巴細胞增殖及其產(chǎn)生的細胞因子水平，恢復(fù)Th1(IL-2)與Th2(IL-4)之間以及Th與Ts之間的平衡有關(guān)。GCS是木瓜調(diào)節(jié)小鼠細