吉西他濱調(diào)節(jié)胰腺癌細(xì)胞ABCG2膜表達(dá)誘導(dǎo)耐藥機(jī)制研究.pdf

1、胰腺癌是一種惡性程度極高，預(yù)后極差的惡性腫瘤。美國的統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，由癌癥引發(fā)的死亡中，胰腺癌排第四位，5年生存率只有5％-6％。除傳統(tǒng)手術(shù)治療外，吉西他濱化療是治療胰腺癌的主要輔助手段。但應(yīng)用吉西他濱對(duì)病人實(shí)行化療在提高生存率方面僅有輕微的作用，胰腺癌病人的病情仍在不斷惡化，這主要是由腫瘤先天或者獲得性的耐藥機(jī)制導(dǎo)致的，尤其是獲得性耐藥，然而目前在其他腫瘤中發(fā)現(xiàn)的耐藥機(jī)制可能不是導(dǎo)致胰腺癌高水平耐藥的主要原因。因此尋找新的胰腺癌耐藥機(jī)制

2、對(duì)于胰腺癌的治療非常重要。近些年已經(jīng)有一些研究把抗凋亡PI3K/Akt信號(hào)通路和胰腺癌細(xì)胞系的耐藥性聯(lián)系到了一起;乳腺癌耐藥蛋白(BCRP/ABCG2)也被發(fā)現(xiàn)可能在多種腫瘤中與腫瘤產(chǎn)生耐藥性相關(guān)。
　　目的:探究PI3K/Akt信號(hào)通路與ABCG2跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白在胰腺癌細(xì)胞產(chǎn)生吉西他濱(Gem)耐藥性過程中的影響及其作用機(jī)制。
　　方法:本實(shí)驗(yàn)首先通過免疫組化的方法檢測跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白ABCG2在胰腺癌組織及癌旁組織的表達(dá)情況。

3、三株胰腺癌細(xì)胞系SW1990、Capan-2、PANC-1通過CCK-8的方法檢測其對(duì)吉西他濱的耐藥性，用生存率及半數(shù)抑制濃度(IC50)表示。通過免疫印跡的方式檢測三株細(xì)胞ABCG2蛋白總量的表達(dá)差異以及經(jīng)Gem處理以后P-Akt、P-Paxillin表達(dá)量的改變，流式細(xì)胞方法檢測用化療藥后細(xì)胞表面ABCG2表達(dá)量的改變。隨后用LY294002作為PI3K/Akt信號(hào)通路抑制劑，外源阻斷該通路以及用siRNA內(nèi)源沉默Akt2基因后檢測

4、三株細(xì)胞系使用Gem處理后的生存率、細(xì)胞表面ABCG2以及總蛋白ABCG2表達(dá)變化。最終通過免疫熒光共聚焦技術(shù)檢測PI3K/Akt信號(hào)通路影響ABCG2蛋白導(dǎo)致胰腺癌細(xì)胞產(chǎn)生對(duì)Gem耐藥的分子機(jī)制。
　　結(jié)果:ABCG2在胰腺癌組織及癌旁組織高表達(dá)，且在癌組織表達(dá)量高于癌旁組織。三株胰腺癌細(xì)胞系SW1990、Capan-2、PANC-1的耐藥性不同，PANC-1IC50值最高，SW1990最低，與ABCG2蛋白細(xì)胞膜表達(dá)水平一致，

5、而ABCG2總蛋白表達(dá)水平卻為Capan-2最高，PANC-1最低，而且三株細(xì)胞系膜表面ABCG2表達(dá)水平均隨著Gem處理時(shí)間的增長而增加。使用Gem處理細(xì)胞后，細(xì)胞內(nèi)P-Akt、P-Paxillin表達(dá)量上升。LY294002抑制PI3K/Akt信號(hào)通路以及siRNA內(nèi)源沉默Akt2后細(xì)胞對(duì)于Gem的耐受性降低，細(xì)胞膜表面ABCG2表達(dá)水平較單獨(dú)Gem處理組降低，而ABCG2總蛋白表達(dá)量不變。免疫熒光共聚焦結(jié)果顯示ABCG2特異性定位

6、于細(xì)胞質(zhì)與細(xì)胞膜，使用Gem處理細(xì)胞后細(xì)胞膜表面ABCG2表達(dá)量上升，LY294002預(yù)處理后ABCG2定位發(fā)生明顯改變，由細(xì)胞膜向細(xì)胞質(zhì)轉(zhuǎn)移。
　　結(jié)論:在體外細(xì)胞水平，胰腺癌細(xì)胞對(duì)吉西他濱耐藥性差異較大，且差異性與細(xì)胞膜表面ABCG2表達(dá)水平相關(guān)與ABCG2總蛋白表達(dá)水平無直接關(guān)系;抑制PI3K/Akt信號(hào)通路可以一定程度上增強(qiáng)胰腺癌細(xì)胞化療敏感性;PI3K/Akt信號(hào)通路可能通過改變ABCG2蛋白定位情況調(diào)節(jié)胰腺癌細(xì)胞對(duì)Ge