腦出血大鼠神經(jīng)干細(xì)胞移植對(duì)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞和γδT細(xì)胞及其相關(guān)因子的調(diào)節(jié)作用.pdf

1、目的:腦出血引起腦損傷的作用機(jī)制復(fù)雜，炎癥反應(yīng)（其中包括淋巴細(xì)胞的激活和炎癥因子釋放）可加重出血后的腦損傷。動(dòng)物模型研究揭示神經(jīng)干細(xì)胞移植可產(chǎn)生腦保護(hù)性作用，促進(jìn)神經(jīng)功能恢復(fù)，但其作用機(jī)制尚不明確。近期中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病研究表明移植的神經(jīng)干細(xì)胞可通過(guò)調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)起到神經(jīng)保護(hù)作用。因此，本研究探討神經(jīng)干細(xì)胞(NSCs)移植入腦出血大鼠模型腦內(nèi)后對(duì)腦組織內(nèi)和血液中γδT細(xì)胞和調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)及其相關(guān)因子的調(diào)節(jié)作用。
　　方法:<

2、br>　　(1)選擇成年雄性SD大鼠作為模型動(dòng)物，立體定向儀向大鼠尾狀核注射Ⅳ型膠原酶建立腦出血模型，從腦組織解剖標(biāo)本冠狀面、MRI檢查和神經(jīng)功能學(xué)三個(gè)方面來(lái)評(píng)價(jià)模型的穩(wěn)定性，解剖標(biāo)本和MRI檢查評(píng)價(jià)血腫的位置、大小和形態(tài)，神經(jīng)功能學(xué)評(píng)價(jià)大鼠神經(jīng)功能缺損的程度。
　　(2)鼠胚胎源性神經(jīng)干細(xì)胞原代購(gòu)于廣州賽業(yè)公司，培養(yǎng)傳代，利用相差顯微鏡觀察神經(jīng)干細(xì)胞的生長(zhǎng)和分化形態(tài)，熒光顯微鏡nestin染色鑒定神經(jīng)干細(xì)胞，用map2標(biāo)記神經(jīng)元

3、及GFAP標(biāo)記星形膠質(zhì)細(xì)胞來(lái)鑒定神經(jīng)干細(xì)胞的分化能力。
　　(3)實(shí)驗(yàn)分組:A組腦出血對(duì)照組(Sham)，B組單純腦出血組(ICH），C組神經(jīng)干細(xì)胞移植對(duì)照組(ICH+V)，D組神經(jīng)干細(xì)胞移植組(ICH+NSCs)，腦出血后3小時(shí)移植神經(jīng)干細(xì)胞。
　　(4)流式細(xì)胞儀檢測(cè)腦出血及神經(jīng)干細(xì)胞移植后腦組織及血液中T淋巴細(xì)胞總數(shù)的變化。
　　(5)流式細(xì)胞儀檢測(cè)腦出血后腦組織及血液中γδT和Treg細(xì)胞的變化。
　　(

4、6)觀察神經(jīng)干細(xì)胞移植對(duì)腦出血大鼠的神經(jīng)功能恢復(fù)的影響。
　　(7)流式細(xì)胞儀檢測(cè)神經(jīng)干細(xì)胞移植后對(duì)腦組織和血液中γδT和 Treg細(xì)胞的影響。
　　(8)應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELASA)檢測(cè)腦出血和神經(jīng)干細(xì)胞移植后大鼠腦組織與血液中相關(guān)細(xì)胞因子的變化。
　　結(jié)果:
　　(1)Ⅳ膠原酶建立的腦出血模型腦內(nèi)血腫形態(tài)規(guī)則，邊界清楚，對(duì)側(cè)肢體功能障礙明顯。
　　(2)培養(yǎng)過(guò)程中，神經(jīng)干細(xì)胞增殖形成大量的神經(jīng)球，

5、nestin染色陽(yáng)性證實(shí)為神經(jīng)干細(xì)胞，經(jīng)誘導(dǎo)分化后Map2或者GFAP染色陽(yáng)性，表明神經(jīng)干細(xì)胞可進(jìn)一步分化為神經(jīng)元或神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞。
　　(3)腦出血及神經(jīng)干細(xì)胞移植后，腦組織中T淋巴細(xì)胞總數(shù)與對(duì)照組比較明顯增多，然而血液中T淋巴細(xì)胞總數(shù)無(wú)明顯變化。
　　(4)腦出血后腦組織中γδT細(xì)胞及Treg細(xì)胞數(shù)量增多，血液中γδT細(xì)胞增多而Treg細(xì)胞數(shù)量無(wú)明顯變化。
　　(5)神經(jīng)干細(xì)胞移植可以促進(jìn)大鼠神經(jīng)功能缺損的恢復(fù)。

6、r>　　(6)神經(jīng)干細(xì)胞移植后腦組織中γδT細(xì)胞數(shù)量明顯降低，Treg細(xì)胞比例及數(shù)量均明顯增多;血液中γδT細(xì)胞數(shù)量明顯降低而Treg細(xì)胞數(shù)量明顯增多。
　　(7)神經(jīng)干細(xì)胞移植增加血液與腦組織中IL-4、IL-10和TGF-β的表達(dá)，減少IL-6與IFN-γ的表達(dá)。
　　結(jié)論:腦出血后神經(jīng)干細(xì)胞移植減輕腦損傷是通過(guò)調(diào)節(jié)Treg細(xì)胞和γδT細(xì)胞及其相關(guān)因子的表達(dá)，提示移植的神經(jīng)干細(xì)胞可能通過(guò)發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用起到神經(jīng)保護(hù)作用。