人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)再生障礙性貧血T細(xì)胞的調(diào)節(jié)作用.pdf

1、目的：觀(guān)察人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞（human unbilical cord mesenchymal stem cel，HUC-MSC）對(duì)植物血凝素（phytohemagglutinin，PHA）誘導(dǎo)的再生障礙性貧血（aplastic anemia，AA）患者T淋巴細(xì)胞增殖、淋巴細(xì)胞亞群及其造血負(fù)調(diào)控因子IL-2、IFN-γ分泌的影響。 方法：用溫消化法從人臍帶（HUC）中分離并用貼壁法培養(yǎng)MSCs，通過(guò)形態(tài)、表型及功能對(duì)其進(jìn)行綜合鑒

2、定；用密度梯度離心法從免疫介導(dǎo)型AA患者骨髓中分離單個(gè)核細(xì)胞（mononuclearcell，MNCs）并經(jīng)過(guò)尼龍棉柱純化得到T淋巴細(xì)胞；將HUC-MSCs與AA患者的T淋巴細(xì)胞按不同的細(xì)胞比例分A、B、C、D四組進(jìn)行混合培養(yǎng)，四組HUC-MSCs與T淋巴細(xì)胞的比例分別為1：1、0.5：1、0.1：1、0.05：1，采用MTT法檢測(cè)各組HUC-MSCs對(duì)PHA誘導(dǎo)下的AA患者淋巴細(xì)胞增殖的抑制率，利用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組T細(xì)胞亞群CD4+

3、/CD8+細(xì)胞比例的變化，采用ELISA法測(cè)定各組培養(yǎng)上清液中造血負(fù)調(diào)控因子IL-2、IFN-γ的水平。 結(jié)果：（1）培養(yǎng)至第2代的MSCs具有長(zhǎng)梭形的典型改變，表面分子檢測(cè)顯示高表達(dá)CD166、CD29、CD54，低表達(dá)CD13、CD34、CD45，經(jīng)體外誘導(dǎo)可分化為脂肪細(xì)胞。綜合分析結(jié)果顯示利用臍帶的確可以獲得MSC。（2）HUC-MSC與AA患者的TLC混合培養(yǎng)后A、B、C組與對(duì)照組比較T淋巴細(xì)胞的增殖受到不同程度的抑制，

4、抑制率分別為56.2±12.1％、43.7±10.4％、28.6±8.9％，三組間比較也存在明顯差異（均P<0.05），A組抑制作用最強(qiáng)，B組次之，C組最弱。而D組與對(duì)照組比較沒(méi)有明顯差異，提示HUC-MSC對(duì)淋巴細(xì)胞增殖的抑制作用呈細(xì)胞劑量依賴(lài)性。（3）HUC-MSC與AA患者的TLC混合培養(yǎng)5天，A、B、C、D四組的CD3+CD8+細(xì)胞比例就有不同程度的下降，培養(yǎng)10天時(shí)下降更為明顯，分別為20.67±5.42％、23.46±3.6

5、1％、27.02±3.17％、32.95±4.02％（P<0.05）。除D組外，其余三組間與對(duì)照組比較有顯著差異（P<0.05）。而各組的CD3+CD4+細(xì)胞比例在混合培養(yǎng)前后卻無(wú)明顯改變（P>0.05）。（4）HUC-MSC與AA患者的TLC混合培養(yǎng)5天時(shí)，A組的IL-2和IFN-γ水平分別為95.47±10.35pg/ml和82.87±13.25pg/ml；B組為115.36±11.05pg/ml和100.40±15.22pg/ml

6、；C組為137.35±11.32pg/ml和126.54±8.25pg/ml；D組為169.67±7.51pg/ml和159.56±7.53pg/ml。共培養(yǎng)10天時(shí)，A組的IL-2和IFN-γ水平分別為56.27±6.59pg/ml和39.35±7.54pg/ml；B組為63.52±6.23pg/ml和52.11±5.85pg/ml；C組70.65±4.57pg/ml和62.45±3.77pg/ml；D組為89.38±5.12pg/m

7、l和75.51±4.64pg/ml。實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組、各實(shí)驗(yàn)組間有顯著差異（P<0.05）。 結(jié)論：HUC能夠在體外培養(yǎng)出MSC。當(dāng)HUC-MSCs與從患者TLC比例為1：1、0.5：1、0.1：1時(shí)，能夠抑制PHA誘導(dǎo)的AA患者T淋巴細(xì)胞的增殖，當(dāng)HUC-MSCs與AA患者TLC比例為0.05：1時(shí)，對(duì)T淋巴細(xì)胞的增殖無(wú)抑制作用。HUC-MSCs主要抑制CD8+T細(xì)胞亞群的增殖，對(duì)CD4+亞群幾乎無(wú)抑制作用，從而對(duì)AA患者比例失