腦出血大鼠神經(jīng)干細胞腦內(nèi)移植及移植后VEGF，F(xiàn)N，LN表達的實驗研究.pdf

1、目的：了解體外培養(yǎng)的大鼠神經(jīng)干細胞（neural stem cells, NSCs）生長、增殖及分化等生物學(xué)特性，體外培養(yǎng)的大鼠NSCs移植入腦出血大鼠腦內(nèi)后，觀察大鼠的神經(jīng)功能缺損恢復(fù)情況，觀察局部腦組織的病理學(xué)變化及移植細胞的存活、遷移、分化，了解血管內(nèi)皮細胞生長因子（vascular endothelial growth factor, VEGF）、纖維粘連蛋白（fibronection, FN）、層粘連蛋白（laminin, L

2、N）的表達情況，探討NSCs移植對腦出血后神經(jīng)功能的修復(fù)作用，移植后VEGF、FN及LN的變化對神經(jīng)回路重建的作用。 方法：采用膠原酶注入大鼠蒼白球方法復(fù)制腦出血大鼠模型；在特定條件下進行大鼠NSCs的體外分離培養(yǎng)、傳代，并觀察其生物學(xué)特性，采用免疫細胞化學(xué)染色方法鑒定培養(yǎng)的NSCs，利用BrdU整合入細胞DNA以標記NSCs；將實驗大鼠隨機分為腦出血模型組（A組）、移植組（B組）、假手術(shù)組（C組）及正常對照組（D組），移植組中

3、，將標記后的NSCs移植于腦出血大鼠腦內(nèi)；在腦出血（或假手術(shù)）后1天、7天、14天及30天，通過神經(jīng)功能評分觀察各組大鼠神經(jīng)功能缺損情況及恢復(fù)情況；并于上述時間點提取各組大鼠腦組織標本，HE染色后觀察各組腦組織病理變化，采用免疫組織化學(xué)染色方法鑒定各組腦組織的神經(jīng)細胞，采用免疫組織化學(xué)方法檢測各時間點各組血腫（損傷或移植）周圍區(qū)及正常組織區(qū)VEGF、FN、LN的表達，采用免疫組織化學(xué)方法觀察移植組BrdU的表達及分布。 結(jié)果：（

4、1）新生大鼠NSCs在含神經(jīng)營養(yǎng)因子bFGF、EGF的特定培養(yǎng)基中可持續(xù)分裂增殖，并形成神經(jīng)球，免疫細胞化學(xué)染色呈nestin陽性反應(yīng)；（2）膠原酶注入大鼠蒼白球后，大鼠出現(xiàn)不同程度的神經(jīng)功能缺損表現(xiàn)，隨時間延長逐漸恢復(fù)；假手術(shù)組僅少數(shù)大鼠出現(xiàn)輕微神經(jīng)功能缺損表現(xiàn)，且恢復(fù)迅速；移植組大鼠移植術(shù)后，神經(jīng)功能缺損恢復(fù)較快，其神經(jīng)功能評分在7天、14天較模型組低（P<0.05）；（3）于模型組及移植組的腦組織可觀察到典型的血腫及水腫、變性、壞

5、死和細胞增生等相關(guān)病理改變，假手術(shù)組病理損害輕微；GFAP陽性細胞及NF-L陽性細胞的形態(tài)及分布因血腫、損傷或移植而有改變； 1天時模型組血腫周圍及室管膜下可見nestin陽性細胞稍增加，7天、14天及30天模型組及移植組nestin陽性細胞無明顯改變；（4）移植組VEGF、FN在7天、14天、30天和LN在7天、14天的表達均高于模型組、假手術(shù)組及正常對照組（P<0.01），移植組有BrdU陽性細胞存在并分布于血腫區(qū)及移植區(qū)周圍。