弓形蟲SAG1-ROP2復(fù)合基因疫苗與免疫佐劑大腸埃希菌腸毒素B亞基對(duì)小鼠的免疫保護(hù)性研究.pdf

1、弓形蟲是一種廣泛寄生于人和動(dòng)物有核細(xì)胞內(nèi)的寄生原蟲,可以感染包括人類在內(nèi)的所有哺乳動(dòng)物,此蟲呈世界性分布,人群感染率相當(dāng)高,許多國(guó)家的平均感染率在25％～50％。弓形蟲侵襲的細(xì)胞種類多,累及器官?gòu)V泛,臨床表現(xiàn)復(fù)雜。在免疫抑制或免疫缺陷患者中(如器官移植、惡性腫瘤、AIDS、長(zhǎng)期使用免疫抑制劑等)可引起嚴(yán)重的器官損害(多見于腦和眼)。先天性感染是弓形蟲通過母嬰傳播的,可引起胎兒流產(chǎn)、死胎或畸胎,是造成兒童先天畸形、弱智及智力發(fā)育遲緩的重要

2、原因之一。此外,弓形蟲病也給畜牧業(yè)生產(chǎn)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。迄今尚無治療弓形蟲病的特效藥物,因此研制安全有效的疫苗極為迫切。
　　 大量的動(dòng)物和人體實(shí)驗(yàn)表明,DNA疫苗不僅可以預(yù)防,還可以治療病原生物的感染。由于弓形蟲生活史較復(fù)雜,抗原成分具有發(fā)育階段的特異性或差異性。因此在研究有關(guān)弓形蟲疫苗的過程中,發(fā)展多種抗原組合、針對(duì)不同生活史發(fā)育階段的復(fù)合多價(jià)疫苗是研究弓形蟲疫苗過程中的一個(gè)發(fā)展方向與共識(shí),這有助于克服單一抗原成分作為候選

3、疫苗的不足。
　　 SAG1抗原作為弓形蟲速殖子表面的主要抗原之一,具有高度的免疫原性和免疫保護(hù)性,是迄今應(yīng)用最多的弓形蟲疫苗候選抗原。SAG1蛋白分布于弓形蟲速殖子表膜、速殖子內(nèi)以及納蟲泡的管狀結(jié)構(gòu)中,是誘導(dǎo)宿主免疫應(yīng)答的主要靶抗原。能夠誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生IgG,IgM,IgE,IgA及sIgA,并可誘導(dǎo)細(xì)胞因子產(chǎn)生。
　　 ROP2蛋白是弓形蟲棒狀體分泌的一種蛋白,存在于弓形蟲速殖子、緩殖子及包囊期,它可誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生以Ig

4、A,IgM,IgG為主的體液免疫,還可被人特異性T細(xì)胞克隆識(shí)別而產(chǎn)生高水平的IFN-γ。SAG1和ROP2在蟲體入侵宿主的過程中相互促進(jìn),其相應(yīng)的抗體可有效拮抗弓形蟲感染。
　　 DNA疫苗誘導(dǎo)體液免疫和細(xì)胞免疫的效率相對(duì)較低,尤其是在大型動(dòng)物和人類中,影響了它的實(shí)際應(yīng)用。我們選用大腸埃希菌腸毒素B亞基(LTB)真核表達(dá)質(zhì)粒作為基因佐劑,以增強(qiáng)弓形蟲復(fù)合抗原基因SAG1-ROP2的免疫效果。
　　 LT是由產(chǎn)腸毒素E.c

5、oli分泌并存在于菌體周質(zhì)中的一種外毒素,由A、B兩種亞單位組成,其中B亞單位既有較強(qiáng)的免疫原性,又有較強(qiáng)的黏膜佐劑效應(yīng),且毒力小、安全性高,是最有潛力的黏膜免疫佐劑之一?？诜捅莾?nèi)接種LT均可誘導(dǎo)黏膜和全身性的免疫應(yīng)答,有效增強(qiáng)抗原蛋白的免疫原性。
　　 該研究選用弓形蟲復(fù)合抗原基因SAG1-ROP2及基因佐劑LTB通過黏膜方式免疫小鼠,觀察并研究其免疫保護(hù)性。結(jié)果表明復(fù)合基因疫苗的免疫效果明顯優(yōu)于單基因疫苗SAG1及ROP2