弓形蟲主要表面抗原SAG1和信號轉(zhuǎn)導蛋白14-3-3的DNA疫苗免疫小鼠誘導的保護性研究.pdf

1、剛地弓形蟲是一種機會性致病原蟲，可引起人畜共患的弓形蟲病。在一些國家，尤其是熱帶國家，弓形蟲病(Toxoplasmosis)一直是重要的公共衛(wèi)生問題，給人類健康和畜牧業(yè)生產(chǎn)帶來了巨大的經(jīng)濟損失。全球感染人數(shù)大約在10-20億，人感染弓形蟲后通常表現(xiàn)為隱性感染，普通隱性感染也可引起強迫癥，精神分裂癥，抑郁癥，阿爾茨海默病，帕金森氏病等。弓形蟲DNA疫苗可有效預防和控制弓形蟲病的傳播，有利于人類健康和畜牧業(yè)生產(chǎn)。實驗研究表明，弓形蟲14-3

2、-3蛋白具有免疫原性和抗原性，是一個有潛力的疫苗候選抗原。在本次研究中，我們評價了弓形蟲SAG1和14-3-3的單基因和復合基因疫苗在小鼠體內(nèi)引起的免疫效應。
　　目的:在本次研究中我們構建了單基因和復合基因疫苗，分別接種BALB/c小鼠，觀察免疫效應。研究的主要目的是評估弓形蟲14-3-3蛋白作為疫苗候選抗原的可能性、驗證弓形蟲SAG1蛋白在小鼠體內(nèi)引起的免疫效應以及評價單基因和復合基因疫苗的免疫效應的差異。
　　方法:實

3、驗過程中，BALB/c小鼠被隨機分成5組，包括三組實驗組(pSAG1、p14-3-3和pSAG1/14-3-3)和兩組對照組(PBS和pBudCE4.1)。所有小鼠經(jīng)肌肉注射共免疫接種質(zhì)粒三次。小鼠血清抗體和細胞因子的水平使用酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)進行測定。末次免疫后兩周，小鼠經(jīng)腹腔注射含弓形蟲速殖子的懸液（1×104/只）。每天觀察并記錄小鼠的生存時間。
　　結果:與對照組相比，所有實驗組小鼠（pSAG1，p14-3-3

4、和pSAG1/14-3-3）體內(nèi)產(chǎn)生的免疫反應類型主要以Th1型為主，產(chǎn)生較高水平的IgG2a和IFN-γ，并且隨著免疫次數(shù)的增加水平逐漸升高(P＜0.05)。在實驗組和對照組中，IL-4和IL-10水平較低，且兩組之間沒有差異(P＞0.05)。在弓形蟲感染攻擊實驗中可以觀察到實驗組小鼠的生存時間顯著延長，而對照組小鼠在7天內(nèi)全部死亡。在弓形蟲速殖子攻擊感染后的第18天，所有小鼠均死亡，表明本次實驗構建的DNA疫苗在小鼠體內(nèi)只能提供部分

5、保護，不能完全抵抗弓形蟲急性感染。與單基因疫苗（pSAG1和p14-3-3）相比，復合基因疫苗(pSAG1/14-3-3)在小鼠體內(nèi)能產(chǎn)生更強的體液免疫和細胞免疫反應，小鼠的生存時間顯著延長(P＜0.05)。
　　結論:弓形蟲14-3-3蛋白在小鼠體內(nèi)能誘導有效的免疫反應，是一個好的疫苗候選抗原。同時，研究證實弓形蟲SAG1蛋白具有較好的免疫原性，是構建復合基因疫苗的首選抗原。從我們的研究結果也可以看出復合基因疫苗能產(chǎn)生更強的免疫