CT聯(lián)合ESA鼻內(nèi)免疫小鼠誘導(dǎo)的抗弓形蟲(chóng)感染保護(hù)性免疫應(yīng)答.pdf

1、目的：觀察霍亂毒素(cholera toxin，CT)聯(lián)合弓形蟲(chóng)排泄-分泌抗原(excreted-secretedantigens，ESA)滴鼻免疫小鼠的黏膜佐劑的適宜劑量以及鼻內(nèi)免疫小鼠誘導(dǎo)的黏膜及系統(tǒng)免疫應(yīng)答，確定其抗弓形蟲(chóng)感染的作用。為弓形蟲(chóng)黏膜疫苗研制提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　 方法：分三部分：第一部分觀察不同劑量CT聯(lián)合ESA滴鼻免疫小鼠的黏膜佐劑效應(yīng)。5～6周齡BALB/c小鼠60只隨機(jī)分為5組，每組12只，分別以0、0.

2、5、1.0、1.5或2.0μgCT聯(lián)合ESA20μg滴鼻免疫小鼠，間隔2周免疫2次。末次免疫后30 d，觀察小鼠的健康狀況、存活率。眼靜脈叢采血后頸椎脫臼處死全部小鼠，分離脾、Peyer's patch(PP)、腸系膜淋巴結(jié)(MLN)計(jì)數(shù)淋巴細(xì)胞。用ELISA法檢測(cè)血清IgG和糞便sIgA水平。第二部分：觀察CT聯(lián)合ESA鼻內(nèi)免疫小鼠誘導(dǎo)黏膜免疫及系統(tǒng)免疫應(yīng)答的效果。5～6周齡BALB/c小鼠48只隨機(jī)分為3組，每組16只。分別用PBS

3、20μl、ESA20μg或CT1.0μg+ESA20μg/只滴鼻免疫小鼠2次，間隔2周。末次免疫后14d，頸椎脫臼處死小鼠，ELISA測(cè)定糞便和鼻咽沖洗液sIgA抗體水平；計(jì)數(shù)PP、腸上皮淋巴細(xì)胞(IEL)、鼻相關(guān)淋巴組織(NALT)、鼻通道(NC)淋巴細(xì)胞數(shù)，免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)CD4+、CD8+T細(xì)胞亞群水平。第三部分：觀察CT聯(lián)合ESA鼻內(nèi)免疫小鼠誘導(dǎo)的抗弓形蟲(chóng)感染作用。6周齡BALB/c小鼠60只，隨機(jī)分為3組，每組20只。分別用

4、PBS20μl、ESA20μg或CT1.0μg+ESA20μg/只滴鼻免疫2次，間隔2周。末次免疫后14 d，用4×104個(gè)弓形蟲(chóng)速殖子/只灌胃攻擊所有小鼠，觀察小鼠健康及死亡情況。速殖子攻擊后30 d，全部小鼠被摘眼球采血后處死，ELISA法檢測(cè)血清IgG和糞便sIgA，計(jì)數(shù)肝、腦組織內(nèi)弓形蟲(chóng)速殖子，分離并計(jì)數(shù)PP和脾淋巴細(xì)胞數(shù)。
　　 結(jié)果：CT聯(lián)合ESA鼻內(nèi)免疫小鼠誘導(dǎo)了MLN、PP和脾淋巴細(xì)胞高水平免疫應(yīng)答，并均呈現(xiàn)一定

5、的劑量效應(yīng)，顯著高于無(wú)佐劑組(P＜0.05)，但較高劑量組(1.0μg、1.5μg和2.0μg)之間無(wú)顯著差異(P＞0.05)。1.0μgCT聯(lián)合ESA鼻內(nèi)免疫小鼠既誘導(dǎo)了較高的黏膜和系統(tǒng)免疫應(yīng)答，又對(duì)小鼠的健康沒(méi)有不良影響，為適宜劑量。CT佐劑聯(lián)合ESA滴鼻免疫BALB/c小鼠可有效誘導(dǎo)GALT和NALT黏膜部位免疫應(yīng)答。CT佐劑組小鼠鼻咽沖洗液和糞便sIgA水平均顯著高于ESA組和PBS組(P＜0.01)，CT佐劑組糞便sIgA水平

6、也顯著高于ESA組(P＜0.01)。CT佐劑組和ESA組小鼠GALT部位的PP淋巴細(xì)胞增生顯著(P＜0.01)，主要以CD4+T細(xì)胞為主；而IEL以CD8+T細(xì)胞增生為主(P＜0.01)，CD4+/CD8+比值降低(P＜0.05)。CT佐劑組NALT內(nèi)淋巴細(xì)胞明顯增生(P＜0.01)，其中CD4+、CD8+T細(xì)胞均有增生(P＜0.01)，CD4+/CD8+比值降低(P＜0.05)。CT佐劑組NC中淋巴細(xì)胞數(shù)明顯升高(P＜0.01)，以C

7、D4+T細(xì)胞為主(P＜0.01)。CT作為佐劑聯(lián)合ESA滴鼻免疫小鼠誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答可有效抵抗弓形蟲(chóng)速殖子攻擊。CT作為佐劑聯(lián)合ESA滴鼻免疫小鼠的健康狀況明顯好于PBS組和ESA組，存活率(95％)也顯著高于PBS組(55％)。與PBS組相比，CT+ESA組肝和腦組織內(nèi)速殖子數(shù)分別減少了80.19％(P＜0.001)和78.24％(P＜0.005)。
　　 結(jié)論：CT具有顯著的佐劑效應(yīng)，CT作為佐劑聯(lián)合ESA滴鼻免疫小鼠可誘導(dǎo)黏