弓形蟲多價(jià)亞單位疫苗免疫保護(hù)性的研究.pdf

1、該研究應(yīng)用SDS-PAGE電泳對弓形蟲體粉碎抗原進(jìn)行分離、純化,選擇特異性抗原組分進(jìn)行配伍,然后與福氏完全佐劑混合免疫小鼠,通過免疫學(xué)檢測評價(jià)抗原刺激機(jī)體產(chǎn)生的免疫水平,并根據(jù)免疫鼠抵抗弓形蟲感染情況,評估弓形蟲抗原組合的免疫保護(hù)作用.結(jié)果發(fā)現(xiàn),弓形蟲RH株蟲體抗原SDS-PAGE電泳顯示有7條特異抗原蛋白帶,對其中4條(P67、P35、P30、P22)分離純化配伍后分別免疫小鼠,發(fā)現(xiàn)各實(shí)驗(yàn)組小鼠脾臟CD<,4><'+>、CD<,8><

2、'+>T淋巴細(xì)胞及其培養(yǎng)液中IL-2、IFN-γ的滴度均隨免疫時(shí)間延長而增加,其中以P30/35配伍組增高最顯著,并且該組合誘導(dǎo)的保護(hù)力也最強(qiáng),攻擊感染后平均存活時(shí)間明顯長于其他實(shí)驗(yàn)組和對照組(P<0.05),表明P30/35蛋白組合的免疫原性較強(qiáng),可作為弓形蟲亞單位疫苗的候選抗原.篩選出抗原后,又對亞單位疫苗必須的免疫佐劑進(jìn)行了優(yōu)化,用無毒副作用的擬菌顆粒、脂磷壁酸、蜂膠分別和弓形蟲P30/35特異蛋白組分混合、碾磨、免疫小白鼠,并以

3、福氏完全佐劑作對照,觀察佐劑效果.結(jié)果顯示擬菌顆粒佐劑能顯著增強(qiáng)弓形蟲P30/35抗原刺激機(jī)體產(chǎn)生的細(xì)胞免疫、體液免疫和免疫保護(hù)力.擬菌顆粒佐劑組小鼠產(chǎn)生的IL-2較福氏完全佐劑稍低,但明顯高于其它實(shí)驗(yàn)組和對照組(P均<0.01);IFN-γ和CD<,4><'+>、CD<,8><'+>T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)與福氏完全佐劑比較無顯著性差異(P均>0.05),產(chǎn)生的IgG抗體水平則顯著高于福氏完全佐劑組(P<0.01),并且擬菌顆粒輔助P30/35

4、抗原抵抗弓形蟲攻擊感染后的存活時(shí)間比無佐劑輔助的P30/35抗原對照組延長79.8％,也與福氏完全佐劑組相比無顯著性差異,而脂磷壁酸和蜂膠的佐劑效果與擬菌顆粒和福氏完全佐劑相比較差(P均<0.01),顯示擬菌顆粒佐劑具有提高P30/35抗原的免疫原性和增強(qiáng)免疫應(yīng)答的良好作用.將篩選的弓形蟲P30/35抗原與擬菌顆粒佐劑制成的多價(jià)亞單位疫苗免疫小鼠,結(jié)果顯示該疫苗能較好地提高機(jī)體的細(xì)胞免疫和體液免疫水平,該疫苗免疫的小鼠抵抗弓形蟲攻擊感染