大鼠β-防御素-2的重組表達及抗菌活性檢測.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、感染性疾病從古至今都是醫(yī)學研究中極為重要的課題。雖然抗生素在防治微生物感染中發(fā)揮了巨大的作用,但由于長期濫用抗菌藥物,細菌耐藥性問題已經成為困擾醫(yī)學界的一大難題,解決細菌耐藥性問題成為當務之急,因此,尋找和開發(fā)無耐藥性的新型抗菌藥物具有非常重要的現實意義??咕淖鳛樯餀C體內天然免疫系統(tǒng)的重要組成部分,具有抗細菌、抗病毒、抗真菌、抗腫瘤等多種生物學活性,并且由于它獨特的抗菌機制使得病原微生物不易產生耐藥性。因此,具有作為新型抗生素的潛在

2、應用前景。
   目的:構建大鼠β-防御素-2(rBD2)的真核表達載體pCAGG-rBD2,轉染小鼠纖維母細胞(L929),檢測目的基因在轉染細胞中的表達,初步測定表達產物的體外抗菌活性,為解決細菌耐藥性問題提供理論和實驗基礎。
   方法:以大鼠肺組織總RNA為模板,采用RT-PCR的方法獲得β-防御素-2基因cDNA,將其克隆到pGEM-T Easy載體并構建含有目的片段的真核表達載體pCAGG-rBD2,經脂質體

3、介導轉染L929細胞,用RT-PCR和Western blotting等方法檢測目的基因表達情況;用Kirby-Baue紙片擴散法檢測其生物學活性。
   結果:RT-PCR擴增出約230bp的片段,將其連接到克隆載體后,測序分析表明與Genebank中rBD2cDNA序列一致,為rBD2編碼全序列;所構建的真核表達載體pCAGG-rBD2經酶切鑒定并測序,結果表明其核苷酸序列及連接方向正確,可進行轉染;以轉染pCAGG-rBD

4、2的L929細胞總RNA為模板,用RT-PCR擴增出特異條帶;Western blotting檢測轉染細胞的培養(yǎng)液呈陽性,表明構建的真核表達載體pCAGG-rBD2轉染L929細胞后,能正確表達大鼠β-防御素-2;K-B紙片法檢測結果顯示轉染pCAGG-rBD2細胞的培養(yǎng)液對金黃色葡萄球菌具有殺滅作用。
   結論:獲取并克隆了rBD2基因,成功構建了rBD2的真核表達載體pCAGG-rBD2,轉染pCAGG-rBD2的L929

5、細胞能高效表達rBD2,轉染細胞的培養(yǎng)液具有殺滅金黃色葡萄球菌的生物活性。
   黃芪誘導大鼠氣管β-防御素-2的表達及抗感染機理的探討
   目的:通過黃芪等中藥成分誘導大鼠氣管β-防御素-2基因表達,探討黃芪防治呼吸道感染的作用機理。
   方法:將健康的Wistar大鼠隨機分成三組:空白對照組、黃芪組、雙黃連組,分別給予灌胃,于第五日按照RNA提取試劑盒提取氣管總RNA,并且運用逆轉錄聚合酶鏈式反應(RT-

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