β-防御素-1，2在牙周炎大鼠牙周及腮腺組織中的表達.pdf

1、目的:研究大鼠β-防御素-1,2(β-defensin-1,2,RBD-1,RBD-2)在牙周炎模型牙齦上皮及腮腺導(dǎo)管上皮的分布,探討RBD-1、RBD-2在大鼠牙周炎發(fā)生、發(fā)展過程中的作用,從而為闡明防御素在牙周免疫防御中的作用提供初步的理論依據(jù)。
　　 方法:選用純種6月齡雄性Wistar大鼠30只,隨機分為三組:正常組、牙齦炎組、牙周炎組,每組各10只。牙齦炎和牙周炎組用直徑0.2mm的正畸結(jié)扎絲結(jié)扎大鼠雙側(cè)上頜第一磨牙,

2、并置于齦下。隨機分為兩組:結(jié)扎2周的為牙齦炎組,結(jié)扎6周的為牙周炎組。牙齦炎組大鼠于試驗的第2周,牙周炎組和正常組大鼠于試驗的第6周分別股動脈放血處死。取大鼠上頜骨連同牙及牙周組織、腮腺及其部分導(dǎo)管分別置于10％甲醛緩沖液固定48h,10％乙二胺四乙酸(EDTA)脫鈣40d。乙醇梯度濃度脫水,石蠟包埋。將各組標本制成頰舌向4gm厚的組織切片,用SP免疫組化染色法分別檢測觀察三組大鼠牙周、腮腺及其導(dǎo)管中RBD-1、RBD-2蛋白表達情況。

3、
　　 結(jié)果:
　　 1牙齦炎和牙周炎動物模型的建立
　　 1.1肉眼觀察:
　　 大鼠結(jié)扎2周后,肉眼觀察大鼠上頜第一磨牙牙齦呈暗紅色,齦乳頭和齦緣紅腫,探診出血,但未探及明顯的牙周袋,故診斷為牙齦炎;當大鼠結(jié)扎6周后,除牙齦紅腫,探之出血加重外,還可探及深牙周袋,故診斷為牙周炎。
　　 1.2 HE染色結(jié)果:
　　 1.2.1牙周組織的HE染色結(jié)果
　　 正常組:溝內(nèi)上皮完整,

4、有角化,角化程度較口腔齦上皮差,結(jié)合上皮位置正常,牙齦上皮無明顯炎癥細胞浸潤,牙齦及牙周膜纖維排列有序、規(guī)律,牙槽骨邊緣整齊,未見破骨細胞。
　　 牙齦炎組:溝內(nèi)上皮完整,結(jié)合上皮位置正常,牙齦的纖維結(jié)締組織水腫明顯,其間有炎癥細胞浸潤,毛細血管數(shù)目增多、管腔擴張充血。上皮釘突數(shù)目增多,伸長,牙周膜纖維排列正常,牙槽骨邊緣整齊,未見破骨細胞。
　　 牙周炎組:溝內(nèi)上皮潰瘍、壞死,結(jié)合上皮向根方增殖,上皮和固有層內(nèi)有大量炎

5、癥細胞浸潤,牙周膜纖維排列紊亂,毛細血管數(shù)目增多、管腔擴張充血,牙槽骨內(nèi)可見破骨細胞。
　　 1.2.2腮腺的HE染色結(jié)果:
　　 正常組:管壁上皮細胞排列整齊,胞核圓形且較大,管腔內(nèi)無炎癥細胞浸潤,導(dǎo)管周圍及腺體內(nèi)亦無炎癥細胞浸潤。
　　 牙齦炎組與牙周炎組腮腺組織表現(xiàn)與正常組相似。
　　 2免疫組化觀察
　　 2.1牙齦組織中RBD.1、RBD-2的表達情況
　　 在正常組、牙齦炎組和

6、牙周炎組口腔齦上皮和溝內(nèi)上皮均可觀察到RBD-1表達的棕黃色陽性染色顆粒,即RBD-1在三組中均有表達,陽性染色區(qū)域主要分布在上皮細胞的胞漿內(nèi)。包括角化層、顆粒層、棘層,主要分布于棘層近顆粒層的細胞胞漿內(nèi),強染色區(qū)域呈帶狀或片狀分布,基底細胞未見明顯著色。與之相比,溝內(nèi)上皮著色較淺。但在結(jié)合上皮、上皮下結(jié)締組織及骨組織中未見到RBD-1表達。
　　 RBD-2的表達情況與RBD.1的表達情況相似,均只在上皮部位表達,結(jié)締組織及骨

7、組織未見表達。
　　 2.2腮腺導(dǎo)管中RBD-1、RBD-2的表達情況
　　 正常組、牙齦炎組和牙周炎組腮腺導(dǎo)管中均可觀察到RBD-1表達的棕黃色陽性染色顆粒,即RBD-1均有表達,陽性染色區(qū)域主要分布在腮腺導(dǎo)管的上皮細胞的胞漿內(nèi),腮腺腺泡不著色。
　　 RBD-2的表達情況與RBD-1的表達情況相似。
　　 3半定量分析結(jié)果
　　 RBD-1在口腔齦上皮的陽性細胞計數(shù)在正常組、牙齦炎組和牙周炎組

8、無明顯差異(P＞0.05)。在溝內(nèi)上皮中,RBD-1在正常牙齦組的陽性細胞計數(shù)顯著高于牙齦炎組和牙周炎組(P＜0.05),而牙齦炎組和牙周炎組之間無顯著性差異(P＞0.05);三組中RBD.1在口腔齦上皮中的表達均明顯高于溝內(nèi)上皮(P＜0.05)。
　　 RBD-2在口腔齦上皮的陽性細胞計數(shù)在牙齦炎組高于正常組和牙周炎組(P＜0.05),正常組高于牙周炎組(P＜0.05);在溝內(nèi)上皮中,RBD-2在正常組的陽性細胞計數(shù)顯著高于牙

9、齦炎組和牙周炎組(P＜0.05),而牙齦炎組和牙周炎組之間無顯著性差異(P＞0.05);三組中RBD-2在口腔齦上皮中的表達均明顯高于溝內(nèi)上皮(P＜0.05)。
　　 RBD-1在腮腺導(dǎo)管上皮的陽性細胞計數(shù)在正常組、牙齦炎組和牙周炎組無明顯差異(P＞0.05)。
　　 RBD-2在腮腺導(dǎo)管上皮的陽性細胞計數(shù)在正常組、牙齦炎組和牙周炎組亦無明顯差異(P＞0.05)。
　　 結(jié)論:1.成功建立了大鼠牙齦炎、牙周炎的動

10、物模型。2.RBD-1、RBD-2在正常及牙齦炎、牙周炎狀態(tài)下的牙齦組織中都有表達,主要表達于口腔齦上皮,在溝內(nèi)上皮有微弱表達,結(jié)合上皮、結(jié)締組織及骨組織均無表達。3.RBD-1在正常及牙齦炎、牙周炎狀態(tài)下的口腔齦上皮組織中都有表達,其表達強度無明顯差異;RBD-2在正常及牙齦炎、牙周炎狀態(tài)下的口腔齦上皮組織中亦都有表達,但在牙齦炎狀態(tài)下表達強度明顯升高,在牙周炎狀態(tài)下表達強度顯著降低。4.RBD-1、RBD-2在正常和牙齦炎、牙周炎狀