GLP-1受體激動劑對糖尿病大鼠心肌組織Bcl-2、Bax表達(dá)的影響.pdf

1、目的：糖尿病(diabetesmellitus，DM)是多種因素引起的以慢性高血糖為特征的全身性代謝紊亂，可導(dǎo)致機(jī)體多器官系統(tǒng)損害的一組臨床綜合征。心血管疾病是糖尿病的主要并發(fā)癥之一，有關(guān)糖尿病心血管疾病的研究主要集中于大血管病變。近年來研究證實(shí)糖尿病心肌病(diabeticcardiomyopathy，DCM)是糖尿病引起的主要心臟微血管病變。其中心肌細(xì)胞凋亡是DCM的主要病理改變之一。Bax、B細(xì)胞淋巴瘤/白血病-2(Bcellly

2、mphoma/leuklemia-2，Bc1-2)是目前研究較多的線粒體源性凋亡的調(diào)控凋亡基因，且二者的比值常用來衡量凋亡水平。艾塞那肽(exenatide，EX)是近幾年人工合成的胰高糖素樣肽-1(Glucagon-likepeptide-1，GLP-1)受體激動劑，是治療糖尿病的新型藥物。EX的功能主要由GLP-1受體(glucagon-likepeptide-1receptor，GLP-1R)介導(dǎo)完成，近年研究發(fā)現(xiàn)，EX對心肌損傷

3、具有保護(hù)作用，但其具體機(jī)制尚不清楚。本研究通過觀察艾塞那肽干預(yù)后糖尿病大鼠心肌組織病理結(jié)構(gòu)變化，檢測Bc1-2、Bax在mRNA及蛋白水平的表達(dá)變化，并計(jì)算Bc1-2/Bax比值，以探討EX是否對糖尿病心肌細(xì)胞凋亡具有保護(hù)作用。
　　方法：清潔級近交系成年雄性Wistar大鼠36只，在無特定病原體(specificpathogen-free，SPF)級條件下單籠飼養(yǎng)，飼以標(biāo)準(zhǔn)飼料。適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后隨機(jī)選取10只為對照組(N組)，給

4、予普通飼料喂養(yǎng)；其余26只給予高糖高脂飼料喂養(yǎng)，喂養(yǎng)8周后予以檸檬酸緩沖液稀釋的鏈脲佐菌素(STZ)30mg/kg(濃度20mg/ml)鼠尾靜脈注射，N組給予相同劑量檸檬酸緩沖液鼠尾靜脈注射。72小時后測血糖，血糖≥16.7mmol/L、飲水>40ml/d、尿糖陽性(++～++++)，則DM造模成功(22只)。造模成功后隨機(jī)分為DM組11只、EX干預(yù)組11只，干預(yù)組給予EX(1.0nmol·kg-1·d-1)皮下注射，N組和DM組以等量

5、生理鹽水皮下注射。12周末，各組分別存活10只，稱量大鼠體重，股動脈放血處死大鼠，取血檢測生化指標(biāo)，迅速切取左心室心肌組織，部分置于10％中性福爾馬林中固定，部分置于液氮中固定，-80℃低溫冰箱保存，后進(jìn)行如下步驟：①HE染色光鏡下觀察心肌組織結(jié)構(gòu)變化；②應(yīng)用RT-PCR法檢測各組大鼠心肌組織Bc1-2、Bax的mRNA表達(dá)情況，并計(jì)算Bc1-2/Bax的mRNA比值；③應(yīng)用WesternBlotting分析大鼠心肌組織Bc1-2、Ba

6、x的蛋白表達(dá)，并計(jì)算Bc1-2/Bax蛋白的比值；以GAPDH為內(nèi)參照，以相應(yīng)目的蛋白條帶與GAPDH的比值計(jì)算蛋白的相對表達(dá)量。
　　結(jié)果：①HE染色結(jié)果顯示：N組大鼠心肌組織結(jié)構(gòu)正常；DM組大鼠心肌組織結(jié)構(gòu)紊亂，細(xì)胞肥大、增殖，細(xì)胞核固縮明顯，細(xì)胞間界限不清，心肌纖維重度水腫、部分?jǐn)嗔?，心肌間質(zhì)纖維化；EX組大鼠心肌組織病變較DM組減輕，但心肌組織結(jié)構(gòu)未恢復(fù)到正常。②三組大鼠心肌組織均有Bc1-2、Bax表達(dá)。與N組大鼠相比，

7、DM組大鼠心肌組織BaxmRNA及蛋白表達(dá)增強(qiáng)，Bc1-2mRNA及蛋白表達(dá)降低，且Bc1-2/Bax的比值下降(P<0.01)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；EX組與DM組相比，Bc1-2mRNA及蛋白表達(dá)增高，BaxmRNA及蛋白表達(dá)降低，Bc1-2/Bax的比值升高(P<0.01)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論：①DM組大鼠心肌組織Bax表達(dá)量較N組大鼠顯著增加，Bc1-2表達(dá)量較N組大鼠顯著降低，Bc1-2/Bax的比值下降，證實(shí)了心