GLP-1受體激動劑對IGT大鼠心肌細胞內質網(wǎng)應激的研究.pdf

1、目的：
　　 通過觀察胰高血糖素樣肽-1(GLP-1)受體激動劑艾塞那肽(Exendin-4)干預治療糖耐量減低(IGT)大鼠心肌細胞C/EBP同源蛋白(CHOP)及凋亡蛋白Caspase3的變化，探討Exendin-4對糖耐量減低大鼠內質網(wǎng)應激介導的心肌細胞凋亡的保護作用及其作用機制。
　　 方法：
　　 54只4～5周齡(150g～170g)清潔雄性Wistar大鼠，購于山西醫(yī)科大學生理實驗室。適應性喂養(yǎng)l周

2、后（5只/籠），隨機分為A組(n=18)和B組(n=36)，A組常規(guī)飼料喂養(yǎng)（13.4kJ/g，其中脂肪提供熱量占10.2％，蛋白質占23.3％，碳水化合物占66.5％）；B組高糖高脂飼料喂養(yǎng)（21.8kJ/g，其中脂肪提供熱量占56.0％，蛋白質占7.0％，碳水化合物占37.0％）。均自由飲水，室溫控制在18～22℃，相對濕度30％～70％。兩組大鼠每日早晚各投食一次，每日每只大鼠的投食量為其體重的3％。同組動物體重相差小于10％，各

3、組間動物體重相差小于5％。12周時，行口服葡萄糖耐量試驗(OGTT):禁食12h-14h后，鼠尾采血用快速血糖儀測空腹血糖(FBG)，以50％葡萄糖注射液2g/kg灌胃，2h后再次鼠尾采血測餐后2h血糖(2hPG)。以7.8mmol/L≤2hPG＜11.1mmol/L并持續(xù)一周以上為IGT造模成功[12]。A組大鼠血糖均在正常范圍內，為糖耐量正常對照組(NGT組，n=18)繼續(xù)普通飼養(yǎng)。B組成模32只，成模率為88％。將B組隨機分為糖耐

4、量減低對照組(IGT組，n=16)，Exendin-4干預組（Ex組，n=16），兩組均繼續(xù)高糖高脂飼養(yǎng)。成模后隨機抽取NGT組、IGT組、Ex組各1/2數(shù)量大鼠，分別稱重，行OGTT試驗，測2hPG。次日禁食12～14h后用5％水合氯醛0.6ml/100g腹腔注射麻醉，迅速取出心臟，用冰肝素生理鹽水沖洗干凈并用濾紙吸干水分后取心尖部組織用10％甲醛液固定，脫水，石蠟包埋，常規(guī)切片，用于HE染色光鏡下觀察心肌細胞形態(tài)學改變及免疫組化檢測

5、Caspase3蛋白的表達。剩余心肌組織迅速放入液氮中冷凍，用錫紙包裹后儲存于-70℃冰箱用于PCR測CHOP蛋白mRNA使用。剩余1/2數(shù)量大鼠，NGT組繼續(xù)常規(guī)飼料喂養(yǎng)，IGT組、Ex組均繼續(xù)高糖高脂飼料喂養(yǎng)，均自由飲水。Ex組給予Exendin-4（禮來公司生產）5ug/kg腹部皮下注射，每日兩次，NGT組與IGT組均給予等體積生理鹽水皮下注射。于干預4周后將大鼠全部處死，行以上指標的檢測，并且在光鏡下觀察心肌組織變化。所有計量資

6、料以均數(shù)±標準差((x)±s)表示，采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件，各組間比較采用單因素方差分析(ANOVA)，LSD檢驗，以P≤0.05為差異有統(tǒng)計學意義。相關性采用Pearson相關分析。
　　 結果：
　　 1.體重及血糖比較：干預前，與NGT組比較，IGT組和Ex組大鼠體重均升高(307.44±71.85 vs.171.74±12.1)（321.71±105.65 vs.171.74±12.1），差異均有統(tǒng)計學意義

7、(均P＜0.05)，2hPG均升高（5.96±0.77 vs.9.69±0.33）(5.96±0.77 vs.9.26±0.38)。與IGT組比較，Ex組大鼠體重、2hPG水平均無明顯變化(321.71±105.65 vs.307.44±71.85)(9.28±0.38 vs.9.69±0.33)（均P＞0.05）。Exendin-4干預4周后，與IGT組比較，Ex組體重、2hPG水平均降低（520.75±18.42 vs.445.88

8、±20.29）（10.28±0.38 vs.7.19±0.34），差異有統(tǒng)計學意義（均P＜0.05）。與干預前Ex組比較均降低(513.12±11.86 vs.321.71±105.65)(9.28±0.38 vs.7.19±0.34)差異有統(tǒng)計學意義(均P＜0.05)。
　　 2.大鼠心肌組織Caspase3蛋白表達含量的比較：干預前，與NGT組比較，IGT組和Ex組Caspase3蛋白表達含量升高（49.27±2.14vs.

9、30.65±1.46）（49.73±3.56vs.30.65±1.46），差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；與IGT組比較，Ex組大鼠Caspase3蛋白表達較高（49.73±3.56vs.49.27±2.14）但差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。干預后，與IGT相比Ex組Caspase3蛋白表達降低（40.79±3.8lvs.53.31±3.03），差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；與干預前Ex組比較Caspase3蛋白表達降低（40

10、.79±3.8lvs.49.73±3.56），差異有統(tǒng)計學意義（均P＜0.05）。與NGT組比較Caspase3蛋白表達升高（40.79±3.8lvs.31.57±0.93），差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　 3.大鼠心肌組織CHOP mRNA含量的比較：干預前，與NGT組比較，IGT組和Ex組心肌組織CHOP表達水平均升高(0.44±0.13vs.0.03±0.01)(0.49±0.67vs.0.03±0.01)，差異

11、有統(tǒng)計學意義（均P＜0.05）。與IGT組比較，Ex組CHOP表達水平升高(0.49±0.67vs.0.44±0.13)，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。Exendin-4干預4周后，與IGT組比較，Ex組CHOP表達水平降低(0.17±0.07vs.2.44±2.04)，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。與干預前Ex組比較亦降低(0.17±0.07vs.0.49±0.67)，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　 4.各組

12、大鼠心肌HE染色光鏡下觀察：HE染色顯示，干預前，NGT組心肌細胞排列整齊，細胞核大小均一，胞漿染色均勻。IGT組及Ex組心肌細胞肥大、排列不規(guī)整，細胞核大小不一，胞漿染色不均勻。干預后，Ex組與IGT組比有所好轉，心肌細胞肥大不明顯，疏松樣變減輕，排列較規(guī)整，未見明顯的肌纖維斷裂，細胞核較規(guī)則。與干預前的Ex組比較，Ex組同樣有所好轉。
　　 5.IGT大鼠心肌組織Caspase3蛋白的表達與CHOP蛋白mRNA的表達呈正相關