肽核酸（PNA）探針檢測鼠疫耶爾森氏菌的研究.pdf

1、目的：利用特異的肽核酸(PNA)探針、鏈霉親和素包被的磁性納米顆粒(磁珠)和Cy5納米顆粒，結(jié)合熒光掃描技術(shù)，建立一種特異、快速、準(zhǔn)確的檢測鼠疫菌的方法。 方法：針對鼠疫菌pMTl質(zhì)粒上的cafl基因設(shè)計并合成一對特異PNA探針，經(jīng)生物素標(biāo)記后，分別與鏈霉親和素包被的磁珠或Cy5納米顆粒結(jié)合；探針與待測鼠疫菌的DNA雜交后，磁性納米顆粒牢固連接靶核酸．探針結(jié)合體，用磁分離架收集后即可得純化的特異核酸分子，經(jīng)變性處理后對Cy5熒光

2、納米顆粒進(jìn)行熒光掃描檢測。本研究探討了多個實驗因素對測定的影響，并進(jìn)行了特異性和靈敏度檢測。此外，本研究將PNA探針與DNA探針、磁性納米顆粒與市售磁珠、Cy5熒光納米顆粒標(biāo)記的探針與單個Cy5分子標(biāo)記的探針進(jìn)行比較，從而驗證PNA探針、磁性納米顆粒及Cy5熒光納米顆粒在核酸檢測技術(shù)中的優(yōu)勢。 結(jié)果：利用Expedite8909核酸合成系統(tǒng)合成了PNA探針，建立并優(yōu)化了利用PNA探針檢測鼠疫菌的方法，得到較好的線性關(guān)系；檢測的靈

3、敏度為0．9[tg／mL(待測DNA)。通過多項比較，驗證了PNA探針、磁性納米顆粒及Cy5熒光納米顆粒在核酸檢測技術(shù)中的優(yōu)勢。 結(jié)論：PNA探針的結(jié)構(gòu)特點決定了其具有卓越的雜交親和性能和特異識別能力，從而使本研究顯示出較高的特異性和靈敏度，具有較好的應(yīng)用前景：磁性納米顆粒的應(yīng)用可簡便且有效地將雜交復(fù)合體與未雜交核酸或過量的檢測探針分離，大大降低非特異核酸分子的干擾，提高了檢測靈敏度；Cy5熒光納米顆粒具有的光穩(wěn)定性和信號放大作