丹參酮ⅡA對于大鼠海水淹溺性肺損傷的作用及其機制研究.pdf

1、實驗一：丹參酮IIA對于大鼠海水淹溺性肺損傷以及肺組織細胞凋亡的作用及其機制的研究
　　海水淹溺是事故意外死亡的一個重要原因。除了因窒息死亡外，其致死的原因主要為急性肺損傷（acutelunginjury，ALI）和急性呼吸窘迫綜合癥（Acuterespiratorydistresssyndrome，ARDS），是各種原因?qū)е路尾垦装Y加重和肺部通透性增加的結(jié)果。近年來許多研究顯示細胞凋亡與肺損傷的發(fā)生之間有著密切的聯(lián)系，肺上皮細胞

2、和微血管內(nèi)皮細胞凋亡的增加導致了肺泡血管-上皮屏障通透性改變，直接引起了肺損傷的發(fā)生。丹參酮IIA（TanshinoneIIA，TIIA）是中藥丹參的一種主要活性成分，目前研究表明丹參酮IIA具有抗炎和抗氧化等作用，在抗感染、抗動脈粥樣硬化、改善微循環(huán)等方面有著較好的療效和廣泛的應用。
　　1.目的：
　　本實驗研究了細胞凋亡在海水淹溺性急性肺損傷發(fā)病機制中的意義，探索丹參酮IIA對于海水淹溺大鼠模型中肺損傷的治療作用以及對

3、于肺組織細胞凋亡的影響，探討丹參酮IIA是否通過調(diào)控Akt和ERK路徑來抑制細胞凋亡從而達到減輕肺損傷的作用。
　　2.方法：
　　實驗動物分為三組：(1)空白對照組：不給于海水注入及丹參酮IIA干預，余處理同其他組；(2)海水組：動物麻醉后，行頸正中切口，暴露氣管，用注射器刺入氣管，勻速在4分鐘內(nèi)注入對應量海水(4mL/kg)；(3)丹參酮IIA干預組：各組實驗動物注入海水10分鐘后，于腹腔內(nèi)注入丹參酮IIA(50mg/k

4、g)。各組動物在各實驗截點放血處死，取右中肺組織行肺血管伊文思藍通透性檢測，右下肺組織切片行組織病理學和TUNEL檢測，左肺組織行干濕比檢測，右上肺組織勻漿行ERK1/2、Akt、Caspase-3、Bcl-2的Westernblotting檢測。
　　3.結(jié)果：
　　丹參酮IIA可以顯著改善海水淹溺后導致的大鼠肺病理學改變，減輕PaO2的下降，緩解肺水腫、肺血管的滲漏以及BALF中細胞的滲出程度。如TUNEL結(jié)果所示，氣管

5、內(nèi)注入海水可導致大鼠肺組織凋亡細胞數(shù)量的增加，同時，海水組較空白對照組凋亡相關(guān)因子Caspase-3增加明顯，而凋亡抑制因子Bcl-2則顯著降低，并且海水注入導致Akt和ERK1/2的活性降低。相比較海水組，丹參酮IIA處理組凋亡細胞的數(shù)量明顯減少，增加了抗凋亡因子Bcl-2的含量、抑制了肺組織中Caspase-3蛋白含量的上升，同時上調(diào)了Akt和ERK1/2的活性。
　　4.結(jié)論：
　　細胞凋亡在海水淹溺性肺損傷的發(fā)病機制

6、中有著重要的意義，而丹參酮IIA可以改善肺損傷的病理生理損害以及減輕肺損傷大鼠肺組織水腫和細胞凋亡程度，這種作用可能部分是通過調(diào)節(jié)Akt和ERK1/2信號傳導通路從而減少肺組織細胞凋亡來實現(xiàn)的。
　　實驗二：丹參酮IIA對于海水淹溺性肺損傷大鼠肺組織中AQP1、AQP5表達變化的作用及其機制的研究
　　海水淹溺后，事故現(xiàn)場因大量海水快速進入肺內(nèi)、阻塞呼吸道引起喉頭、氣管痙攣可導致急性窒息死亡，后期病程發(fā)展中肺水腫為一個突出的

7、臨床表現(xiàn)，并可進一步引起ALI和ARDS，因而，在吸收肺內(nèi)海水的同時減少肺內(nèi)液體的形成、及時有效的緩解肺水腫的發(fā)生顯得尤為重要。AQPs（Aquaporins）是一類可調(diào)節(jié)進出細胞膜水分子的蛋白質(zhì)通道，其中在肺部表達的AQP1、AQP5在肺泡毛細血管間水轉(zhuǎn)運中發(fā)揮著重要作用。丹參酮IIA作為中藥丹參的一種含量最高的有效成分，可以通過下調(diào)生長因子和血管活性物質(zhì)、抑制血小板聚集、抑制交感神經(jīng)節(jié)細胞等機制發(fā)揮松弛平滑肌、改善微循環(huán)等作用。

8、r>　　1.目的：
　　本實驗通過建立大鼠海水淹溺性肺損傷的模型，研究AQP1、AQP5在氣管內(nèi)注入海水后肺組織內(nèi)含量的改變，同時探討丹參酮IIA對于海水淹溺型肺損傷和對AQP1、AQP5的作用，了解其是否通過調(diào)控AQP1、AQP5的表達來減輕海水淹溺性肺水腫從而達到緩解肺損傷的發(fā)生。
　　2.實驗方法：
　　2.1.動物實驗：動物實驗分組及處理同實驗一。各組動物均在實驗截點放血處死，取右中肺組織行肺血管伊文思藍通透性

9、檢測，右下肺組織切片行組織病理學及AQP1、AQP5蛋白免疫組化檢測，左肺組織行干濕比檢測，右上肺組織勻漿行AQP1、AQP5Westernblotting及RT-PCR分子生物學檢測。
　　2.2.細胞試驗：A549細胞經(jīng)胰酶消化并計數(shù)后接種于培養(yǎng)皿中，孵育24小時待所有細胞貼壁后進行實驗分組：空白對照組，海水組（海水濃度25％），25ug/mlTIIA組+海水組，丹參酮IIA處理組在加入海水的同時加入對應劑量的丹參酮IIA，用

10、培養(yǎng)液補足液體總量為8ml。
　　3.實驗結(jié)果：
　　大體實驗中，通過改善血氣的指標和肺組織病理學、緩解肺水腫和肺血管滲漏，丹參酮IIA可以減輕海水淹溺性肺損傷。肺組織蛋白的免疫組化、RT-PCR和Westernblotting的數(shù)據(jù)顯示海水注入肺部導致了肺組織中AQP1、AQP5的mRNA和蛋白水平的上調(diào)，mRNA的改變在4h達到頂峰，AQP1、AQP5蛋白的改變在4-6h達到頂峰。而丹參酮IIA處理組AQP1、AQP5的

11、表達較海水組明顯降低，但仍高于空白對照組。在細胞實驗中，同樣顯示海水浸泡后的A549細胞AQP1、AQP5蛋白表達明顯增加，而丹參酮IIA可以調(diào)節(jié)AQP1和AQP5蛋白的過度表達，從而保護A549細胞正常形態(tài)及活性。
　　4.結(jié)論：
　　AQP1、AQP5在大鼠海水淹溺性肺損傷的發(fā)生機制中有著重要的意義，兩者的過度表達可能參與引起海水淹溺性肺水腫的發(fā)生和發(fā)展，而丹參酮IIA可以改善海水淹溺性肺損傷以及減輕肺水腫的程度，下調(diào)A