PRP對(duì)兔來源脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞Wnt3基因和Klotho基因表達(dá)的影響.pdf

1、研究背景:
　　脂肪干細(xì)胞(adipose-derived stem cells，ADSCs)在2001年被Zuk等于脂肪組織中提取。而后發(fā)現(xiàn)在不同培養(yǎng)基作用下，可誘導(dǎo)ADSCs向脂肪細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、成骨細(xì)胞、肌細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞、肝細(xì)胞、胰島細(xì)胞等分化，上述研究表明ADSCs還具有跨胚層、跨系分化的潛能。ADSCs具有以下優(yōu)點(diǎn):①儲(chǔ)量豐富，來源充足;②獲取方法簡單;③脂肪組織中干細(xì)胞含量豐富;④脂肪干細(xì)胞增殖能力強(qiáng)，多次傳代遺傳性狀

2、仍穩(wěn)定;⑤屬自體移植，無排斥反應(yīng)。因此脂肪干細(xì)胞作為組織工程的種子細(xì)胞越來越受到關(guān)注。自體脂肪移植目前廣泛應(yīng)用于整形外科，但是其成活率低，導(dǎo)致需要多次手術(shù)或產(chǎn)生多種并發(fā)癥，使其成為整形外科急需解決的問題。我們?cè)诩?xì)胞實(shí)驗(yàn)及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中證明富血小板血漿(platelet-rich plasma，PRP)可以提高脂肪移植的成活率，但是其主要作用機(jī)制尚不十分明確。Wnt3基因和Klotho基因是干細(xì)胞增殖的相關(guān)基因，可能與提高脂肪移植成活率有關(guān)，

3、因此本實(shí)驗(yàn)中，我們向ADSCs中加入PRP，對(duì)這兩種基因的啟動(dòng)情況進(jìn)行研究。
　　目的:
　　研究自體富血小板血漿(platelet-rich plasma，PRP)對(duì)兔來源脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞（adipose-derived stem cells，ADSCs）Wnt3基因和Klotho基因啟動(dòng)情況的影響。
　　方法:
　　脂肪干細(xì)胞提取自新西蘭大白兔附睪脂肪組織，采用形態(tài)學(xué)及誘導(dǎo)分化進(jìn)行細(xì)胞鑒定后，將細(xì)胞培養(yǎng)至第四

4、代，取新西蘭大白兔腹主動(dòng)脈血通過傳統(tǒng)二次離心法制備富血小板血漿PRP(platelet-rich plasma)、貧血小板血漿PPP(platelet-poor plasma)，將脂肪干細(xì)胞在含PRP（實(shí)驗(yàn)組）、PPP（對(duì)照組）及空白全培（空白組）各5％的培養(yǎng)液中分別培養(yǎng)24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)，將各組細(xì)胞裂解提取總RNA，通過RT-PCR查看兩種目的基因Wnt3基因和Klotho基因表達(dá)情況。
　　結(jié)果:
　　1.原代

5、兔脂肪干細(xì)胞早期為橢圓形，25cm2培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)4-6小時(shí)后細(xì)胞開始貼壁，逐漸變?yōu)殚L梭形，8-10小時(shí)后80％橢圓形細(xì)胞貼壁，隨著細(xì)胞增殖，呈梭形漩渦狀生長;經(jīng)過3-4次傳代培養(yǎng)后，細(xì)胞基本得到純化，倒置顯微鏡下，形態(tài)學(xué)符合干細(xì)胞形態(tài)特征。
　　2.分別向成脂、成骨誘導(dǎo)分化后用油紅O染色和茜素紅染色，均能成功著色，證實(shí)為脂肪細(xì)胞和骨細(xì)胞，證明了此種細(xì)胞具有多向誘導(dǎo)分化能力。
　　3.RT-PCR結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組Wnt3基因和K