IGF-1基因轉(zhuǎn)染對脂肪間充質(zhì)干細胞生物活性的影響.pdf

1、背景:
　　間充質(zhì)干細胞作為一種具有自我更新和多向分化潛能的細胞已經(jīng)廣泛應(yīng)用于基礎(chǔ)研究和臨床實驗,其在細胞治療領(lǐng)域展現(xiàn)了良好的前景。而脂肪間充質(zhì)干細胞(adipose tissue-derived mesenchymal stem cell,ADMSCs)由于具有來源廣泛,取材方便,體外可大量擴增等優(yōu)點而越來越被大家所接受。但是干細胞移植仍然面臨許多問題,其中之一為植入細胞滯留率和存活率低下。目前有許多手段可用于提高干細胞的活性及

2、移植效應(yīng),包括移植前預(yù)處理、改變移植途徑、基因修飾等。其中基因修飾引起了人們的興趣,通過促進或抑制基因的表達進一步提高干細胞的治療作用。然而可用于基因修飾的基因以及介導(dǎo)載體種類繁多,因此選擇合適的基因以及攜帶基因的載體成為了提高干細胞移植效應(yīng)亟待解決的問題。
　　目的:
　　研究IGF-1基因轉(zhuǎn)染對ADMSCs生物活性的影響,并對其凋亡機制做初步研究。旨在為提高ADMSCs的活力和治療效果,并最終應(yīng)用于臨床提供實驗依據(jù)。

3、r>　　方法:
　　分離、培養(yǎng)并鑒定ADMSCs,用攜帶IGF-1基因的慢病毒載體感染ADMSCs。實驗分為ADMSCs,ADMSCs-GFP,ADMSCs-IGF三組,于病毒感染后四天收集細胞上清液和蛋白,行ELISA和Western-blot,測定各組中上清液IGF-1的分泌情況以及蛋白中Akt和P-Akt的表達。用MTT法測定各組細胞的生長情況并繪制生長曲線,用annexin-V測定各組細胞凋亡。
　　結(jié)果:
　

4、　成功分離、培養(yǎng)了大鼠ADMSCs,表型鑒定CD31、CD34、CD45表達陰性,CD29及CD90表達陽性。ADMSCs經(jīng)過誘導(dǎo)可以向骨,脂肪和心肌細胞分化。IGF慢病毒表達載體感染脂肪間充質(zhì)干細胞,熒光顯微鏡下觀察到持續(xù)表達的綠色熒光。ADMSCs-GFP和ADMSCs-IGF組的凋亡率明顯高于ADMSCs組,而ADMSCs-GFP與ADMSCs-IGF相比,前者的凋亡率要高于后者。MTT法顯示ADMSCs-IGF可以促進細胞生長,

5、在第5,6天時顯著高于其他倆組。ADMSCs可以通過旁分泌的形式分泌IGF-1,而ADMSCs-IGF組進一步促進了IGF-1的分泌,并且與時間成正相關(guān)。AKT在三組均表達但無統(tǒng)計學(xué)差異,但ADMSCs-IGF促進了P-Akt的表達水平,與其他組相比具有顯著性差異。
　　結(jié)論:
　　1.成功分離培養(yǎng)了ADMSCs,并用IGF-1慢病毒載體成功轉(zhuǎn)染ADMSCs;
　　2.IGF-1基因修飾ADMSCs可以使IGF-1持續(xù)