乙醇對(duì)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞神經(jīng)肽及凋亡相關(guān)基因表達(dá)的影響.pdf

1、背景:
　　 近年來(lái)乙醇導(dǎo)致股骨頭壞死(osteonecrosisofthefemoralhead，ONFH)的臨床報(bào)道日漸多見(jiàn)，現(xiàn)在已成為非創(chuàng)傷性股骨頭壞死的重要誘因，但確切病理學(xué)機(jī)制仍不完全清楚。研究發(fā)現(xiàn)，人骨髓中存在一種骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(humanbonemarrowmesenclymalstemcells，hBMSCs)，hBMSCs具有多向分化潛能，在特定的條件下可分化為成骨細(xì)胞、成軟骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞等，這種

2、分化受多種神經(jīng)遞質(zhì)影響，人骨髓中存在的某些神經(jīng)遞質(zhì)具有促進(jìn)成骨和成血管作用，能夠促使hBMSCs向骨組織或血管組織分化，保持正常的骨代謝。
　　 凋亡是自然的生理過(guò)程，由于內(nèi)外環(huán)境激發(fā)所致細(xì)胞自身主動(dòng)、有序的死亡方式，過(guò)程涉及精確的基因轉(zhuǎn)錄和蛋白質(zhì)合成。半胱氨酸蛋白酶-3（caspase-3）作為凋亡重要的效應(yīng)蛋白，其活性測(cè)定成為凋亡相關(guān)研究的重要指標(biāo)。于此同時(shí)，B淋巴細(xì)胞瘤-2(bcl-2)作為一種調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡的重要基因，具有

3、抑制凋亡作用。
　　 目的:
　　 觀(guān)察在乙醇作用下人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(hBMSCs)中降鈣素基因相關(guān)肽受體(CGRPR)、凋亡相關(guān)基因bcl-2和caspase-3、過(guò)氧化物酶體增殖子活化受體-γ(PPAR-γ)、及成骨轉(zhuǎn)錄因子(Runx2)mRNA表達(dá)的變化。
　　 方法:
　　 使用密度梯度離心貼壁培養(yǎng)獲得hBMSCs，流式細(xì)胞儀鑒定后傳至第3代，隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組，實(shí)驗(yàn)組加入濃度為0.09mo

4、l/L乙醇，對(duì)照組正常培養(yǎng)。培養(yǎng)11天后，采用實(shí)時(shí)定量-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-qPCR)分析兩組神經(jīng)肽受體CGRPR、PPAR-γ、Runx2及凋亡相關(guān)基因bcl-2、caspase-3mRNA的表達(dá)。
　　 結(jié)果:
　　 1.原代細(xì)胞接種24h后，大量類(lèi)圓形或多角形細(xì)胞貼壁。72h后出現(xiàn)梭形貼壁細(xì)胞及細(xì)胞集落，胞質(zhì)豐富伸出突起、核居中。3～11d貼壁細(xì)胞明顯增多，細(xì)胞集落持續(xù)增大并逐漸融合，細(xì)胞呈漩渦狀、輻射狀平行排列，

5、細(xì)胞界限不清。對(duì)原代培養(yǎng)的hBMSCs細(xì)胞進(jìn)行流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞表面標(biāo)志物結(jié)果顯示，CD44、CD29陽(yáng)性表達(dá)率分別為(94.2±0.5)％、(92.3±0.7)％，而CD45、CD34表達(dá)率分別為(5.6±0.5)％、(2.7±0.8)％，結(jié)果表明本研究分離培養(yǎng)細(xì)胞為hBMSCs。
　　 2.實(shí)驗(yàn)組CGRPR、Runx2、bcl-2mRNA表達(dá)較對(duì)照組降低，CGRPR(1.90E-01±4.12E-02vs3.27E-01±8

6、.24E-02,t=6.66,p＜0.05)、Runx2(1.28E-01±3.18E-02vs2.50E-01±5.33E-02,t=8.80,p＜0.05)、bcl-2(1.65E-01±3.98E-02vs2.95E-01±6.78E-02,t=7.35,p＜0.05),caspase-3mRNA與PPAR-γmRNA表達(dá)較對(duì)照組增高，Caspase-3(5.27E-01±1.26E-02vs3.17E-01±7.46E-02,t