激素對(duì)兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞神經(jīng)遞質(zhì)表達(dá)的影響.pdf

1、背景與目的:由于激素在臨床上的廣泛應(yīng)用和醫(yī)學(xué)水平的不斷發(fā)展,激素所致的股骨頭缺血性壞死(osteonecrosis of the femoral head,ONFH)表現(xiàn)出逐年增加趨勢(shì),現(xiàn)已占非創(chuàng)傷性股骨頭壞死首位。但該病的確切發(fā)病機(jī)制現(xiàn)仍未完全清楚。
　　 近年來的研究發(fā)現(xiàn),在骨髓腔中除了造血干細(xì)胞之外,還存在著一種具有多向分化潛能的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMS

2、Cs),其在特定條件下能夠分化為成骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、軟骨細(xì)胞及神經(jīng)細(xì)胞等,這種分化受多種神經(jīng)遞質(zhì)的影響。已有實(shí)驗(yàn)證明大劑量激素不僅會(huì)誘導(dǎo)BMSCs向脂肪細(xì)胞分化,還能夠影響骨內(nèi)神經(jīng)纖維中遞質(zhì)的表達(dá),進(jìn)而使組織的成骨及成血管作用下降,導(dǎo)致組織內(nèi)骨細(xì)胞和血管的形成及修復(fù)能力降低,引起骨和血管組織的損傷以及凝血機(jī)制的改變,最終發(fā)生股骨頭缺血性壞死。目前已有研究表明,激素能夠影響動(dòng)物體骨組織內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)在神經(jīng)纖維中的表達(dá),而本實(shí)驗(yàn)則主要通過體外分

3、離培養(yǎng)兔BMSCs,以10-7mol/L地塞米松進(jìn)行誘導(dǎo),采用分子生物學(xué)檢測(cè)方法,觀察激素對(duì)BMSCs中多種神經(jīng)遞質(zhì)或其受體表達(dá)的影響,以及這種影響與成骨分化的關(guān)系,從而進(jìn)一步探討激素性O(shè)NFH的發(fā)生機(jī)制。
　　 材料與方法:取兔四肢長(zhǎng)骨骨髓,經(jīng)密度梯度離心和貼壁培養(yǎng)后,獲得原代BMSCs,將傳代培養(yǎng)的第3代間充質(zhì)干細(xì)胞隨機(jī)分為兩組,實(shí)驗(yàn)組培養(yǎng)基中加入濃度為10-7mol/L,地塞米松,對(duì)照組則正常培養(yǎng)。分別于誘導(dǎo)后第4,7,1

4、1,15天提取RNA,運(yùn)用熒光定量PCR技術(shù)測(cè)定細(xì)胞中神經(jīng)生長(zhǎng)因子(nerve growthfactor,NGF)、堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(basic fibrocyte growth factor,bFGF)、降鈣素基因相關(guān)肽受體(calcitontin gene-related peptide receptor,CGRPR)、P物質(zhì)受體(substance P receptor,SPR)、血管活性腸肽受體(vasoactive in

5、testinalpeptide receptor,VIPR)和成脂轉(zhuǎn)錄因子過氧化物酶體增殖子活化受體-γ(peroxisom proliferator-activeted receptor-γ,PPARγ)mRNA表達(dá),并在誘導(dǎo)第14天檢測(cè)培養(yǎng)液中骨鈣素(osteocalcin,OC)含量和細(xì)胞內(nèi)堿性磷酸酶(alkalinephosphatase,ALP)活性。
　　 結(jié)果:實(shí)驗(yàn)組內(nèi)NGF、FGF、CGRPR、SPR、VIPR