激素對人骨髓間充質(zhì)干細胞凋亡及神經(jīng)肽受體基因表達的影響.pdf

1、背景:
　　 自首例激素誘發(fā)股骨頭壞死(osteonecrosis of the femoral head，ONFH)被Pietrogrand報道以來，世界各地陸續(xù)出現(xiàn)類似病例的報道。隨著許多內(nèi)科疾病中激素治療發(fā)揮著不可替代的作用，包括其用藥本身的長期性，近年來激素性ONFH的發(fā)病率逐步增高，且其發(fā)病過程進展迅速，短時間內(nèi)出現(xiàn)關節(jié)破壞、功能喪失，嚴重影響患者的日?；顒雍蜕钭岳恚o生理和心理上帶來了嚴重的災難，也成為醫(yī)學界面臨的

2、大難題。具體的發(fā)病機制尚不清楚，目前普遍被學者們接受的觀點是脂肪代謝紊亂、骨內(nèi)壓升高、骨質(zhì)疏松和激素的毒性作用等，但還都不能全面的闡述其發(fā)病的病理機制。人骨髓間充質(zhì)干細胞(hBMSCS)具有多向分化的潛能，是激素性ONFH發(fā)病機制的基礎。隨著國外學者發(fā)現(xiàn)在激素性ONFH的骨組織中存在大量凋亡細胞，提出骨細胞凋亡可能是導致激素性ONFH的原因;一些學者通過動物實驗，研究了bcl-2和caspase-3的表達情況，進一步證實了激素可導致成骨

3、細胞和骨細胞凋亡，參與了激素性ONFH的發(fā)病機制。同時，有研究表明骨組織中存在大量的肽能神經(jīng)，在骨代謝及修復功能上發(fā)揮著重要的作用。迄今為止，激素對hBMSCS中凋亡相關基因及神經(jīng)肽受體基因表達的影響，國內(nèi)外文獻中尚無報道。
　　 目的:
　　 通過體外細胞學實驗，觀察在激素誘導下，人骨髓間充質(zhì)干細胞(hBMSCs)內(nèi)b淋巴細胞瘤-2(bel-2)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（caspase-3）、降鈣素基因相關肽受體(

4、CGRPR)、P物質(zhì)受體(SPR)以及過氧化物酶體增殖子活化受體γ(PPARγ)、成骨轉(zhuǎn)錄因子Runx2等基因表達的變化，進一步探討激素性ONFH的發(fā)病機制。
　　 方法:
　　 密度梯度離心和貼壁培養(yǎng)獲得hBMSCs，倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)，流式細胞儀鑒定后，將傳代培養(yǎng)的第3代細胞隨機分為兩組，實驗組加入濃度為107mmol/L的地塞米松，對照組正常培養(yǎng)。于誘導后的第7d，實時定量-聚合酶鏈反應(RT-qPCR)分別

5、測定bcl-2 mRNA、caspase-3 mRNA、CGRPR mRNA、SPR mRNA、Runx2 mRNA以及PPARγ mRNA的表達。
　　 結(jié)果:
　　 分離培養(yǎng)的hBMSCs呈均勻一致的長梭形，排列成旋渦狀或放射狀。實驗組caspase-3 mRNA、PPARγ mRNA較對照組明顯升高，2-△△Ct分別為5.99±2.00、6.93±0.70;而bcl-2 mRNA、CGRPR mRNA、SPR mR