人胚胎干細(xì)胞來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞用于腫瘤基因治療的研究.pdf

1、間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cells，MSCs)是中胚層發(fā)育的早期細(xì)胞，具備成體干細(xì)胞的基本特性可在體外擴(kuò)增、具有多向分化潛能，體內(nèi)注射能夠歸巢到腫瘤部位并且在腫瘤部位聚集增殖。人胚胎干細(xì)胞(human embryonic stem cells，hESCs)是一種來(lái)自于囊胚的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)的全能干細(xì)胞具有自我更新和多向分化潛能，遺傳特性穩(wěn)定，并能夠在體外長(zhǎng)期擴(kuò)增而不喪失其分化的潛能。體外分化誘導(dǎo)發(fā)現(xiàn)hESCs可向MSCs

2、方向分化，但對(duì)hESCs體內(nèi)能否向MSCs分化尚不清楚，本課題將探索從hESCs體內(nèi)分化產(chǎn)物——畸胎瘤中分離MSCs，并研究其作為腫瘤基因治療的細(xì)胞載體的可行性。 第一章：hESCs體內(nèi)分化獲取畸胎瘤，并從畸胎瘤中分離MSCs。 目的：通過(guò)hESCs體內(nèi)分化獲取畸胎瘤，并從畸胎瘤中分離MSCs。 方法：約5×106個(gè)hESCs(表達(dá)綠色熒光蛋白)注射至SCID-beige小鼠后腿肌間隙，8-10周后解剖小鼠取出畸

3、胎瘤，病理切片可見(jiàn)三個(gè)胚層組織；同時(shí)將瘤組織剪碎、胰酶消化，用含有10ng/uL堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)的MSCs專用培養(yǎng)基Mesencult進(jìn)行貼壁培養(yǎng)。 結(jié)果：經(jīng)過(guò)連續(xù)幾次傳代，獲得了較純的hESC來(lái)源的MSCs(hESC-MSCs)，熒光顯微鏡下均可見(jiàn)綠色熒光；核型檢測(cè)為正常人類核型46，XX;該hESC-MSCs具有和骨髓來(lái)源的MSCs相似的形態(tài)特征

4、，表現(xiàn)為短梭形或成纖維細(xì)胞樣形態(tài)；對(duì)其進(jìn)行流式細(xì)胞學(xué)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，CD105、CD90、CD73、CD29和CD49b為陽(yáng)性，CD14、CD34和CD45為陰性；體外誘導(dǎo)分化表明hESC-MSCs具有向脂肪細(xì)胞和骨細(xì)胞分化的潛能。 結(jié)論：結(jié)果表明可從hESC的畸胎瘤中分離MSCs。 第二章：hESC-MSCs向腫瘤遷移初步研究。 目的：探索hESC-MSCs靜脈內(nèi)注射后在小鼠腫瘤組織中遷移情況，及其作為腫瘤基因治療細(xì)

5、胞載體的可行性。 方法：通過(guò)BALB/C裸鼠右背部皮下注射2.5x106個(gè)BEL-7402細(xì)胞，建立腫瘤小鼠模型，當(dāng)腫瘤組織生長(zhǎng)至4-5mm左右時(shí)，分別通過(guò)尾靜脈注射和直接腫瘤組織內(nèi)注射5x104個(gè)hESC-MSCs細(xì)胞/裸鼠，注射6天后解剖裸鼠取出瘤組織，冰凍切片觀察hESC-MSCs在裸鼠體內(nèi)及腫瘤組織中的分布情況。 結(jié)果：結(jié)果發(fā)現(xiàn)裸鼠腫瘤組織中可見(jiàn)表達(dá)綠色熒光的細(xì)胞，而在裸鼠的其他器官組織中未能檢測(cè)到綠色熒光。