人胚胎干細(xì)胞抗腫瘤作用的體外初步研究.pdf

1、目的：
　　1.研究體外共培養(yǎng)情況下人胚胎干細(xì)胞H9對肝癌HepG2細(xì)胞的抑制作用。
　　2.研究人胚胎干細(xì)胞 H9與乳腺癌細(xì)胞共培養(yǎng)上清液對乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞的體外抑制作用。
　　方法：
　　1.建立人胚胎干細(xì)胞(H9)與肝癌 HepG2細(xì)胞共培養(yǎng)體系,顯微鏡下觀察胚胎干細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞生物學(xué)行為的影響，流式細(xì)胞儀檢測HepG2細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞的凋亡與周期的影響。
　　2.建立人胚胎干細(xì)胞(H9)

2、與乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞接觸式共培養(yǎng)體系，收集共培養(yǎng)上清液。以單獨(dú)培養(yǎng)的H9細(xì)胞上清為對照，顯微鏡下觀察共培養(yǎng)上清液對腫瘤細(xì)胞生物行為學(xué)的影響，用MTT法檢測上清液對MDA-MB-231細(xì)胞增殖的影響，Hoechst染色及流式細(xì)胞術(shù)檢測上清液對腫瘤細(xì)胞的凋亡影響；Transwell小室法檢測上清液對腫瘤細(xì)胞侵襲和遷移的影響。
　　結(jié)果：
　　1.共培養(yǎng)過程中，肝癌 HepG2細(xì)胞生長受到抑制，隨共培養(yǎng)時(shí)間延長，細(xì)胞數(shù)

3、量逐漸減少，出現(xiàn)老化或凋亡跡象；流式細(xì)胞術(shù)檢測發(fā)現(xiàn)HepG2細(xì)胞凋亡率顯著增加，細(xì)胞周期被阻滯于G0/G1期。
　　2.人胚胎干細(xì)胞(H9)與乳腺癌 MDA-MB-231共培養(yǎng)上清液處理后的乳腺癌 MDA-MB-231細(xì)胞形態(tài)學(xué)發(fā)生變化，出現(xiàn)凋亡跡象；Hoechst33258染色后熒光顯微鏡下可觀察到典型的細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)改變，表現(xiàn)為核縮小、核碎裂等；細(xì)胞凋亡率升高，細(xì)胞生存率和細(xì)胞侵襲、遷移能力均降低，而對照組MDA-MB-231