人肝來源間充質(zhì)干細(xì)胞的分離及其特點(diǎn)的研究.pdf

1、目的:
　　從人肝中分離間充質(zhì)干細(xì)胞（aLHMSCs），檢測分析其表面標(biāo)志、蛋白、基因表達(dá)情況及多向分化能力，并通過間接共培養(yǎng)的方式探索其對活化的人星狀細(xì)胞的影響。
　　方法:
　　從本院肝移植中心獲得人肝組織后，通過Dispase-膠原酶四步灌流法，密度梯度離心和貼壁篩選法得到aLHMSCs。應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測其表面標(biāo)志，細(xì)胞免疫熒光檢測其表面蛋白，RT-PCR檢測基因;并通過誘導(dǎo)培養(yǎng)基誘導(dǎo)檢測其成脂成骨成肝的能力。

2、另外，將其與永生化肝星狀細(xì)胞HSC-Li間接共培養(yǎng)，探索其對HSC-Li活化的影響。
　　結(jié)果:
　　從人肝中分離得到的aLHMSCs成纖維狀，表達(dá)間充質(zhì)干細(xì)胞的表面標(biāo)志（CD73，CD29，CD105，CD44和CD90）;不表達(dá)造血干細(xì)胞的表面標(biāo)志（CD34，CD45，CD117和CD133）、肝祖細(xì)胞標(biāo)志（CK19，CD326，CD117，CD34和AFP)以及肝星狀細(xì)胞標(biāo)志（CK19和HLA-Ⅱ類分子），所以aLHM

3、SCs不是造血細(xì)胞來源，也不同于肝祖細(xì)胞和肝星狀細(xì)胞。aLHMSCs表達(dá)干細(xì)胞標(biāo)志Vimentin及肝細(xì)胞標(biāo)志CK18，CK8和ALB，說明其既有干細(xì)胞又有肝細(xì)胞特性。另外，該細(xì)胞可向脂肪細(xì)胞、成骨細(xì)胞和肝細(xì)胞方向分化。分化獲得的肝樣細(xì)胞肝細(xì)胞特異性基因上調(diào)，具有肝細(xì)胞特異性功能，如糖原儲存，低密度脂蛋白攝取，細(xì)胞色素P450，白蛋白合成和尿素分泌。此外，aLHMSCs可通過分泌細(xì)胞因子來抑制HSC-Li的活化，其中TNF-α參與了抑制