宮血間充質(zhì)干細(xì)胞來(lái)源的外泌體治療急性肝衰竭作用研究.pdf

1、宮血干細(xì)胞（Menstrual blood derived mesenchymal stem cell，MenSCs）是一種新型來(lái)源的成體間充質(zhì)干細(xì)胞，它來(lái)源于女性的月宮血，擁有獲得方便，安全無(wú)倫理問(wèn)題等優(yōu)點(diǎn)。外泌體(exosomes)是一類(lèi)可由不同細(xì)胞產(chǎn)生的直徑在30-100nm之間的雙層脂質(zhì)的囊胞，其中包含有蛋白質(zhì)和RNA等物質(zhì)。本研究重點(diǎn)闡述MenSCs來(lái)源的exosomes在體內(nèi)和體外對(duì)D-GalN/LPS誘導(dǎo)的急性肝衰竭的治療

2、效果，以及小鼠肝臟細(xì)胞AML12條件培養(yǎng)上清（AML12-CM）體外誘導(dǎo)MenSCs分化為肝臟樣細(xì)胞的研究。
　　首先，我們?cè)隗w內(nèi)和體外證實(shí)了MenSCs來(lái)源的exo so mes對(duì)D-GalN/LP誘導(dǎo)的急性肝衰竭的治療效果。在成功提取MenSCs來(lái)源的exosomes后，鑒定其表達(dá)exosomes相關(guān)標(biāo)記蛋白如CD63和TSG101。在體內(nèi)和體外示蹤實(shí)驗(yàn)中，exosomes經(jīng)染色后，可以在小鼠模型肝臟內(nèi)或共培養(yǎng)的肝臟細(xì)胞中觀察

3、到。MenSCs和MenSCs來(lái)源的exosomes的抗體芯片結(jié)果顯示:exosomes含有較高含量的ICAM-1，angiopoietin-2，Axl，angiogenin，IGFBP-6，osteopro tegerin，IL-6和IL-8等蛋白。在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，MenSCs來(lái)源的exo somes可以抑制由D-GalN/LPS誘導(dǎo)的小鼠肝細(xì)胞系A(chǔ)ML12的凋亡。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示MenSCs來(lái)源的exosomes注射到D-GalN/L

4、PS誘導(dǎo)的急性肝衰竭小鼠模型體內(nèi)后，可以顯著抑制小鼠血清中ALT和AST的升高、抑制炎癥因子（IL-6，IL-1β和TNF-α）的升高，并抑制肝臟細(xì)胞的凋亡。我們推測(cè)并證實(shí)其機(jī)制是通過(guò)抑制凋亡因子(caspase-3)的表達(dá)，以及阻止小鼠肝臟中炎癥細(xì)胞（NK細(xì)胞和CD11b+細(xì)胞）在肝臟中聚集而發(fā)揮作用。
　　其次，我們研究了肝細(xì)胞系A(chǔ)ML12細(xì)胞培養(yǎng)上清體外誘導(dǎo)MenSCs分化為肝細(xì)胞樣細(xì)胞。誘導(dǎo)分化21天后，細(xì)胞逐漸發(fā)生胞質(zhì)濃

5、縮形成上皮樣細(xì)胞，表達(dá)ALB、AFP、CK-18、CK-19、HNF-4a和CAT-1等肝細(xì)胞的特異性基因，以及表達(dá)ALB和AFP肝細(xì)胞特異性蛋白。功能實(shí)驗(yàn)顯示誘導(dǎo)分化后的肝細(xì)胞樣細(xì)胞具有糖原儲(chǔ)存，ICG攝取和分泌以及尿素合成能力。
　　綜上，我們通過(guò)D-GalN/LPS誘導(dǎo)的急性肝衰竭小鼠模型和體外共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)初步證實(shí)了MenSCs來(lái)源的exosomes可以用于治療急性肝衰竭。此外，MenSCs在條件培養(yǎng)誘導(dǎo)下可以分化為具有成熟肝