骨髓間充質(zhì)干細胞移植治療急性肝損傷的實驗研究.pdf

1、目的：本研究旨在闡明同種異體骨髓間充質(zhì)干細胞(mesenchymal stem cells，MSCs)移植對急性肝損傷大鼠肝功能和肝臟結(jié)構(gòu)改善情況，并探討干細胞是否通過Rho-ROCK信號通路影響肝臟修復(fù)過程中RhoA mRNA及其蛋白的表達變化，為進一步研究骨髓MSCs修復(fù)急性肝損傷的作用機制提供依據(jù)，并為臨床治療提供新的靶點。 方法：分離培養(yǎng)100g-120g健康幼齡雄性SD大鼠股骨MSCs并進行細胞周期檢測及肝細胞生長因子

2、(hepatocyte growth factor，HGF)誘導(dǎo)和糖原合成功能鑒定。將健康雌性180g-200g三月齡SD大鼠隨機分為3組：正常對照(N)組(n=10)、CCL4(C)組(n=10)及CCL4+MSCs(T)組(n=10)。N組不予任何處理；T組和C組腹腔注射0.1ml/100g60％四氯化碳(carbon tetrachloride，CCL4)花生油溶液制造急性肝損傷模型后24h，分別經(jīng)鼠尾靜脈移植MSCs和等量PBS

3、。肝功能測定及病理組織學(xué)方法觀察移植前后大鼠肝功能及肝臟結(jié)構(gòu)改善情況。并行逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應(yīng)(reverse transcription- polymerase chain reaction, RT-PCR)及Westem blotting分別檢測觀察區(qū)間內(nèi)RhoA mRNA和蛋白的表達變化。 結(jié)果： 1.大鼠骨髓MSCs24h貼壁，原代7d可鋪滿90％以上的瓶底，傳代后3d-5d可鋪滿瓶底，傳至第4代仍保持高增殖性；

4、流式細胞儀檢測平均80％的MSCs處于G0/G1期，少量MSCs處于活躍的增殖期；經(jīng)HGF誘導(dǎo)14d后MSCs具有糖原合成功能。 2.與C組相比，T組經(jīng)移植MSCs后能顯著改善CCL4急性損傷大鼠肝功能(1d時，ALT89.70±3.09 vs147.59±6.83，P<0.05; AST263.67±17.05vs472.68±19.04，P

5、5；AST173.85±16.80 vs260.41±25.35，P<0.05)，并迅速修復(fù)肝臟結(jié)構(gòu)。 3.N組大鼠肝臟的RhoA mRNA和蛋白表達量極低，C組經(jīng)CCL4損傷后，RhoA mRNA和蛋白的表達量迅速增加(1.39±0.046 vs0.57±0.0010，P<0.01;1.23±0.020 vs0.35±0.036，P<0.01)，此后表達量緩慢降低(7d時，0.76±0.019 vs0.57±0.011，P<0

6、.01;0.87±0.042 vs0.34±0.018，P<0.01)。T組經(jīng)MSCs移植后，與C組比較，RhoA mRNA和蛋白表達水平迅速下降(1d時，1.08±0.012 vs1.39±0.046，P<0.01;1.08±0.017 vs1.23±0.020，P<0.01。7d時，0.56±0.018 vs0.76±0.019，P<0.01;0.36±0.014vs0.87±0.042, P<0.01)。 結(jié)論：