硼替佐米對淋巴瘤細(xì)胞株Raji細(xì)胞增殖凋亡影響機(jī)制的研究.pdf

1、目的:淋巴瘤是免疫系統(tǒng)的惡性腫瘤，起源于淋巴組織和淋巴結(jié)，機(jī)體在免疫應(yīng)答時，各種淋巴免疫細(xì)胞增殖分化，其中某一種細(xì)胞惡變將導(dǎo)致淋巴瘤的發(fā)生。一般來講，傳統(tǒng)化療方案（如CHOP，COP等）對淋巴瘤患者初期的治療效果較好，但是一部分患者在緩解后數(shù)月至數(shù)年內(nèi)復(fù)發(fā)。故當(dāng)前的一個首要任務(wù)就是尋求新藥及新化療方案。國外研究表明，體外單用硼替佐米或與其他藥物聯(lián)合應(yīng)用，對多種淋巴瘤細(xì)胞株有增殖抑制作用。SHP-1是一68kD的非跨膜蛋白酪氨酸磷酸酶，它

2、含有SH2結(jié)構(gòu)域，主要在造血細(xì)胞中表達(dá)，是調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)磷酸化水平的關(guān)鍵調(diào)控因子，通過對下游信號蛋白分子脫磷酸化而終止細(xì)胞生長信號或激活凋亡信號。
　　 本實(shí)驗(yàn)擬從細(xì)胞生物學(xué)行為的角度，研究細(xì)胞的生長增殖，研究細(xì)胞凋亡及相關(guān)凋亡基因的表達(dá)，從而探討硼替佐米對Raji細(xì)胞株的影響，并了解在該過程當(dāng)中SHP-1基因所起的作用，以便尋找更多的新治療靶點(diǎn)，為臨床新藥物的研發(fā)提供理論基礎(chǔ)。
　　 方法:用細(xì)胞培養(yǎng)的方法，傳代培養(yǎng)Raj

3、i細(xì)胞株，用生理鹽水將硼替佐米稀釋成不同濃度，分別對Raji細(xì)胞進(jìn)行干預(yù)，并于干預(yù)后不同時間收取各組細(xì)胞。細(xì)胞增殖抑制率通過MTT法來檢測，細(xì)胞凋亡率通過流式細(xì)胞術(shù)來檢測，應(yīng)用藥物前后細(xì)胞中SHP-1基因mRNA的表達(dá)情況通過實(shí)時定量PCR的方法來檢測，同時檢測應(yīng)用藥物前后c-kit、NF-κB、JAK1和caspase-3基因mRNA的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果:
　　 1、硼替佐米對Raji細(xì)胞有明顯的抑制增殖作用，且增

4、殖抑制率與藥物濃度及藥物作用時間呈正相關(guān)。
　　 2、硼替佐米對Raji細(xì)胞有明顯的促進(jìn)凋亡作用，且細(xì)胞凋亡率與藥物濃度及藥物作用時間呈正相關(guān)。
　　 3、Raji細(xì)胞受硼替佐米干預(yù)后，細(xì)胞中SHP-1mRNA表達(dá)的變化情況。
　　 (1)硼替佐米處理組與未加藥物組相比，Raji細(xì)胞中SHP-1mRNA相對表達(dá)量更高，P＜0.05，有統(tǒng)計(jì)差異。
　　 (2)硼替佐米干預(yù)時間相同時，SHP-1mRNA的表達(dá)

5、水平隨著藥物濃度的增加而升高，P＜0.05，有統(tǒng)計(jì)差異。
　　 (3)硼替佐米干預(yù)濃度相同時，SHP-1mRNA的表達(dá)水平隨著藥物作用時間的延長而升高，P＜0.05，有統(tǒng)計(jì)差異。
　　 4、濃度梯度的硼替佐米處理Raji細(xì)胞24小時后，用實(shí)時定量PCR的方法檢測細(xì)胞內(nèi)c-kit、NF-κB、JAK1基因mRNA的表達(dá)水平，與未加藥物組相比較，上述基因表達(dá)水平降低明顯，P＜0.05，且其相對表達(dá)量與藥物濃度呈負(fù)相關(guān)。同樣方

6、法檢測caspase-3基因mRNA的表達(dá)水平，與未加藥物組相比較，該基因表達(dá)水平升高明顯，P＜0.05，且其相對表達(dá)量與藥物濃度呈正相關(guān)。
　　 結(jié)論:硼替佐米可以抑制Raji細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)其凋亡，使SHP-1mRNA的表達(dá)升高，且與藥物濃度和作用時間呈正相關(guān)，同時使caspase-3基因mRNA的表達(dá)升高，使c-kit、NF-κB、JAK1基因mRNA的表達(dá)降低。硼替佐米誘導(dǎo)Raji細(xì)胞凋亡的過程，可能受到SHP-1基因及以