硼替佐米對人骨髓瘤細(xì)胞株RPMI8226RANKL表達(dá)的影響.pdf

1、[目的]： 1.觀察蛋白酶體抑制劑硼替佐米誘導(dǎo)人骨髓瘤細(xì)胞株RPM18226細(xì)胞凋亡的作用。 2.明確硼替佐米對RPM18226細(xì)胞NF-κB受體活化因子配體(receptoractivatorofNF-κBLigand，RANKL)表達(dá)的影響。 [方法]： RPM18226細(xì)胞株用10％FBS-DMEM培養(yǎng)液，置于37℃，5％CO2的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。根據(jù)參考文獻(xiàn)和預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，選擇硼替佐米終濃度分別是10n

2、mol/L、20nmol/L和40nmol/L的培養(yǎng)液組為三個(gè)實(shí)驗(yàn)組，不加藥物的培養(yǎng)液組為對照組。 1.TUNEL法流式細(xì)胞術(shù)分析凋亡細(xì)胞； 2.分光光度法檢測細(xì)胞Caspase-3酶的活性。 3.WesternBlot法檢測細(xì)胞RANKL蛋白表達(dá)量的改變。 [結(jié)果]： 1.10nmol/L、20nmol/L和40nmol/L三種濃度的硼替佐米分別作用6h和24h后，均導(dǎo)致RPM18226細(xì)胞凋亡

3、率增加，與空白組比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，10nmol/L處理6h組P＜0.05，其余各組P＜0.01。表明硼替佐米低、中、高三種濃度在體外均可誘導(dǎo)RPM18226細(xì)胞發(fā)生凋亡。 2.10nmol/L、20nmol/L和40nmol/L的硼替佐米作用6h和24h后，Caspase-3酶的活性增加。硼替佐米作用6小時(shí)三組的Caspase-3酶活性分別是空白組的1.80、3.20和4.69倍；作用24小時(shí)三組的Caspase-3酶活性分別

4、是空白組的5.10、6.50和8.38倍。與空白組比，10nmol/L處理6h組差異無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其余各組差異均有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，且呈濃度依賴性(組內(nèi)兩兩比較，P＜0.01)。 3.10nmol/L、20nmol/L和40nmol/L幾三種濃度的硼替佐米處理細(xì)胞6h和24h后，各組的RANKL表達(dá)量均下降，與對照組比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其中10nmol/L組和20nmol/L處理6h組P＜0.05，其余各組P