硼替佐米對(duì)淋巴瘤細(xì)胞中SHP-1基因表達(dá)影響的研究.pdf

1、目的:淋巴瘤起源于淋巴結(jié)和淋巴組織,其發(fā)生大多與免疫應(yīng)答過(guò)程中淋巴細(xì)胞增殖分化產(chǎn)生的某種免疫細(xì)胞惡變有關(guān),是免疫系統(tǒng)的惡性腫瘤。通常淋巴瘤患者對(duì)傳統(tǒng)的化療方案(如COP,CHOP等)表現(xiàn)出較好的反應(yīng),但多數(shù)往往在達(dá)到緩解后數(shù)月至數(shù)年的時(shí)間內(nèi)出現(xiàn)復(fù)發(fā)。尋求治療新藥及新方案成了當(dāng)前的一個(gè)緊迫問(wèn)題。體外和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)顯示蛋白酶體抑制劑硼替佐米對(duì)包括多發(fā)性骨髓瘤、結(jié)腸癌、慢性淋巴細(xì)胞白血病和胰腺癌在內(nèi)的許多惡性腫瘤有抗癌活性,并具有明顯的抗淋巴瘤作

2、用,其作用機(jī)制涉及特異性地抑制泛素一蛋白酶體通路(UPP),從而發(fā)揮阻止腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)、播散及血管生成的作用,其毒副作用小,并與常規(guī)化療藥物無(wú)交叉耐藥性。國(guó)外基礎(chǔ)研究顯示硼替佐米體外單藥及聯(lián)合其他藥物等均可以抑制多種惡性淋巴瘤細(xì)胞株的增殖。
　　 SHP-1(又稱(chēng)為HCP,SHPTP1,and PTPlc)是一68kD,含有SH2結(jié)構(gòu)域的非跨膜蛋白酪氨酸磷酸酶,它主要表達(dá)于造血細(xì)胞且作為關(guān)鍵的調(diào)控因子調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)的磷酸化水平,SHP

3、-1調(diào)節(jié)不同的跨膜受體胞內(nèi)信號(hào),SHP.1首先表達(dá)在造血干細(xì)胞,它特異的下調(diào)細(xì)胞內(nèi)跨膜受體信號(hào):即伴體內(nèi)酪氨酸激酶激活的生長(zhǎng)因子受體(c-kit,CSF-1,TrkA和EGF等)、細(xì)胞因子受體(Epo-R,IFNα/β-R,IL-3R和EGF等)和參與免疫應(yīng)答的受體例如TCR絡(luò)合物和CD5。Unkeless等發(fā)現(xiàn)在淋巴細(xì)胞,SHP-1通過(guò)它的SH2結(jié)構(gòu)域與抑制免疫受體CD22,CD72,FcγRⅡB,p70-NKB1和KIR酪氨酸抑制基

4、序(ITIM)粘合,使下游蛋白脫磷酸化,終止生長(zhǎng)信號(hào)或激活調(diào)亡信號(hào),因此,發(fā)生在淋巴細(xì)胞內(nèi)的SHP-1機(jī)能障礙會(huì)導(dǎo)致淋巴瘤、白血病或其他腫瘤的發(fā)生。本實(shí)驗(yàn)擬探討硼替佐米對(duì)淋巴瘤細(xì)胞株Raji細(xì)胞生長(zhǎng)抑制及誘導(dǎo)凋亡的作用,并探討SHP-1基因在此過(guò)程中所起的作用,為臨床尋找新的治療靶點(diǎn)提供理論依據(jù)。
　　 方法:通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)的方法對(duì)淋巴瘤細(xì)胞株Raji進(jìn)行傳代培養(yǎng),用不同濃度的硼替佐米對(duì)其進(jìn)行處理,于不同時(shí)段收取細(xì)胞,應(yīng)用MTT法

5、檢測(cè)Raji細(xì)胞增殖抑制率,應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率,用實(shí)時(shí)定量PCR的方法檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組SHP-1基因mRNA的表達(dá)水平。
　　 結(jié)果:
　　 1.隨著硼替佐米濃度、干預(yù)時(shí)間增加,Raji細(xì)胞增殖均有明顯的抑制作用,存在明顯的劑量依賴(lài)性和時(shí)間依賴(lài)性。
　　 2.隨著硼替佐米濃度增加,干預(yù)時(shí)間增加,Raji細(xì)胞株凋亡率增加,存在明顯的劑量依賴(lài)性和時(shí)間依賴(lài)性。
　　 3.硼替佐米對(duì)Raji細(xì)胞中SH

6、P-1mRNA表達(dá)的影響
　　 (1)未加藥物組SHP-1mRNA相對(duì)表達(dá)量明顯低于硼替佐米干預(yù)組SHP-1mRNA相對(duì)表達(dá)量,P<0.05,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 (2)不同濃度藥物干預(yù)相同時(shí)間,隨著硼替佐米濃度增加,SHP-1mRNA表達(dá)水平逐漸升高,P<0.05,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 (3)同一藥物濃度干預(yù)不同時(shí)間,隨著時(shí)間延長(zhǎng),SHP-1表達(dá)水平升高,P<0.05,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)論:硼替佐